马克斯克鲁维酵母D-阿洛酮糖-3-差向异构酶基因工程菌的构建

发布时间：2021-07-12 02:30

　　D-阿洛酮糖是一种自然界天然存在含量极少的稀有糖。D-阿洛酮糖具有零能量且与蔗糖相似的甜度和良好的加工特性,以及预防肥胖、降血脂、抗氧化、保护神经和抑制癌细胞等生理活性,在食品卫生和保健医药等领域具有巨大应用价值。全细胞反应可避免多步操作和耗时的酶纯化过程,然而,D-阿洛酮糖-3-差向异构酶在高温下进行催化反应,催化结束后,常规的宿主如大肠杆菌、酿酒酵母等容易死亡,难以重复利用。为实现工程菌原位催化后的重复利用,本研究通过克隆D-阿洛酮糖-3-差向异构酶基因,构建高效表达载体,转入耐热的马克斯克鲁维酵母中成功实现了高效表达,通过全细胞反应,研究工程菌原位催化特性,采用生物法脱除混合液中的D-果糖,降低生产成本,提高工程菌的重复利用及D-阿洛酮糖的生产效率,初步论证工程菌再生循环催化D-果糖产D-阿洛酮糖的可行性,主要结果如下:（1）D-阿洛酮糖-3-差向异构酶基因的克隆及分析。以根癌农杆菌基因组DNA为模板,通过PCR扩增方法获得目的基因,将其与T克隆载体连接,构建p UCm-T-dpe重组质粒,转入大肠杆菌DH5α,抽取质粒测序验证并分析。同源性分析显示,该基因与NCBI数据库中根癌... 

【文章来源】：合肥工业大学安徽省 211工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

D-阿洛酮糖（橙色）和D-果糖（绿色）的结构

合肥工业大学专业硕士研究生学位论文量的 D-阿洛酮糖，小肠内的吸收可达 66.2%-80%，类似赤藓糖醇在小肠内的吸收率。但 D-阿洛酮糖的摄入经小肠吸收后不能代谢产生能量，不存在碳水化合物的能量增加，并且不会影响血糖和胰岛素水平[8]。即使是一小部分 D-阿洛酮糖到达大肠，仍然不能通过盲肠微生物降解[9]。

图 1.3 A.tumefaciens DPEase 和单体的分子结构Fig 1.3 Molecular structure and monomer of A. tumefaciens DPEase图 1.4 A.tumefaciens DPEase 的二级结构图中，H1，H2，…H13 标记表示 α-螺旋；A，B，…标记表达 β-折叠；γ 表示 γ-转角Fig 1.4 The secondary structure of A. tumefaciens DPEase

【参考文献】：
期刊论文
[1]芽胞杆菌高效分泌表达异源蛋白的研究进展[J]. 王培立,王平,田健,伍宁丰,姚斌.  生物技术进展. 2015(02)
[2]D-阿洛酮糖3-差向异构酶基因在枯草芽孢杆菌中的表达[J]. 贾敏,沐万孟,张涛,江波.  食品与生物技术学报. 2014(11)
[3]低热量甜味剂D-阿洛酮糖的生产应用研究进展[J]. 帅玉英,孙怡,吴晓花,顾钦青,沈宇峰,李佶松.  中国食品添加剂. 2014(09)
[4]生物转化法产D-阿洛糖的分离纯化[J]. 冯再平,沐万孟,江波,张涛,薛冬.  食品工业科技. 2014(22)
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[6]D-阿洛酮糖的分离纯化[J]. 邢庆超,沐万孟,江波,周榴明,储菲菲,张涛.  食品工业科技. 2011(09)

硕士论文
[1]D-阿洛酮糖3-差向异构酶的表达及其固定化转化D-阿洛酮糖的研究[D]. 李晓波.天津科技大学 2013



本文编号：3279009