潜在靶基因ET-1与Ambra1在前列腺癌中的作用机理研究
发布时间:2021-07-23 00:07
目的:在男性癌症中前列腺癌发病频率排第二,致死率排第六。近些年通过大量测序工作筛选到了多个与前列腺癌诊断和治疗相关的生物分子标志物。对这些分子标志物的充分研究和认定将推动它们在癌症诊断治疗中的准确应用。有报道显示由前列腺上皮产生的血管收缩肽内皮素-1(Endothelin-1,ET-1)可能在前列腺癌的进展中起着重要作用。Beclin1调控自噬激活分子1蛋白(Activating Molecule in Beclin 1-Regulated Autophagy 1,Ambra 1),这一新型 ATG 基因在 PCa细胞中对顺铂的敏感性有很强的调节作用。本研究主要探讨ET-1在前列腺癌的进展中的作用以及Ambra1在前列腺癌中通过介导自噬影响化疗敏感性。方法:使用Western印迹来证实了在前列腺癌细胞系(LNCap细胞系,PC3细胞系和DU145细胞系)中ET-1的表达情况。此外,我们利用siRNA敲低了人前列腺癌细胞系中ET-1基因的表达,ET-1基因在人前列腺癌细胞系中影响细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期和细胞侵袭、迁移的全过程。采用Western blot、细胞凋亡、caspase ...
【文章来源】:武汉大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】:98 页
【学位级别】:博士
【部分图文】:
图1?Western印迹分析LNCap细胞系,PC3细胞系和DU145细胞系中ET-1蛋白表达??*代表与对照相比显著性差异(P<0.05,?T检验)??1.3.2前列腺癌细胞PC3细胞系中ET-1敲低体系的建立??
为了下调PC-3细胞中的ET-1表达,我们设计了针对ET-1的siRNA。使用??ET-1?siRNA转染PC3细胞后进行Western印迹分析检测了?ET-1敲低后的表达量。??结果表明,ET-lsiRNA能有效降低ET-1的表达(图2A和2B)。进一步,灰色??值分析也证实了实验组的ET_1蛋白表达与对照组和空白组相比有显着性差异??(图2B)。因此,此后ET-lsiRNA被用于所有后续实验。??t??14??
焚光活化细胞分选仪(Fluorescence?Activated?Cell?Sorter,FACS)结果表明,在??PC3细胞中敲低ET-1会引起G1和G2期细胞比例的上升(图4A),而ET-1敲??低导致的G1期细胞比例上升与转染48小时的细胞数减少(图3),表明了细胞??停滞在了?G1?/G2检查点(checkpoint)上。与两个对照组相比,ET-1敲低的PC3??细胞增殖被显著抑制长达48小时。上述结果表明,ET-1敲除能通过阻止Gl?/?G2??细胞周期进程可以有效地抑制PC3细胞的细胞增殖。此外,与两个对照组相比,??ET-1?siRNA能导致凋亡细胞比例的显著增加,表明敲低ET-1可以促进凋亡的发??生(图4B)。??16??
【参考文献】:
期刊论文
[1]前列腺癌中内皮素及其受体的研究进展[J]. 王青兵,渠武帅,秦大山,王志平. 中华男科学杂志. 2006(05)
本文编号:3298178
【文章来源】:武汉大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】:98 页
【学位级别】:博士
【部分图文】:
图1?Western印迹分析LNCap细胞系,PC3细胞系和DU145细胞系中ET-1蛋白表达??*代表与对照相比显著性差异(P<0.05,?T检验)??1.3.2前列腺癌细胞PC3细胞系中ET-1敲低体系的建立??
为了下调PC-3细胞中的ET-1表达,我们设计了针对ET-1的siRNA。使用??ET-1?siRNA转染PC3细胞后进行Western印迹分析检测了?ET-1敲低后的表达量。??结果表明,ET-lsiRNA能有效降低ET-1的表达(图2A和2B)。进一步,灰色??值分析也证实了实验组的ET_1蛋白表达与对照组和空白组相比有显着性差异??(图2B)。因此,此后ET-lsiRNA被用于所有后续实验。??t??14??
焚光活化细胞分选仪(Fluorescence?Activated?Cell?Sorter,FACS)结果表明,在??PC3细胞中敲低ET-1会引起G1和G2期细胞比例的上升(图4A),而ET-1敲??低导致的G1期细胞比例上升与转染48小时的细胞数减少(图3),表明了细胞??停滞在了?G1?/G2检查点(checkpoint)上。与两个对照组相比,ET-1敲低的PC3??细胞增殖被显著抑制长达48小时。上述结果表明,ET-1敲除能通过阻止Gl?/?G2??细胞周期进程可以有效地抑制PC3细胞的细胞增殖。此外,与两个对照组相比,??ET-1?siRNA能导致凋亡细胞比例的显著增加,表明敲低ET-1可以促进凋亡的发??生(图4B)。??16??
【参考文献】:
期刊论文
[1]前列腺癌中内皮素及其受体的研究进展[J]. 王青兵,渠武帅,秦大山,王志平. 中华男科学杂志. 2006(05)
本文编号:3298178
本文链接:https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3298178.html
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