潜在靶基因ET-1与Ambra1在前列腺癌中的作用机理研究

发布时间：2021-07-23 00:07

　　目的:在男性癌症中前列腺癌发病频率排第二,致死率排第六。近些年通过大量测序工作筛选到了多个与前列腺癌诊断和治疗相关的生物分子标志物。对这些分子标志物的充分研究和认定将推动它们在癌症诊断治疗中的准确应用。有报道显示由前列腺上皮产生的血管收缩肽内皮素-1（Endothelin-1,ET-1）可能在前列腺癌的进展中起着重要作用。Beclin1调控自噬激活分子1蛋白（Activating Molecule in Beclin 1-Regulated Autophagy 1,Ambra 1）,这一新型 ATG 基因在 PCa细胞中对顺铂的敏感性有很强的调节作用。本研究主要探讨ET-1在前列腺癌的进展中的作用以及Ambra1在前列腺癌中通过介导自噬影响化疗敏感性。方法:使用Western印迹来证实了在前列腺癌细胞系（LNCap细胞系,PC3细胞系和DU145细胞系）中ET-1的表达情况。此外,我们利用siRNA敲低了人前列腺癌细胞系中ET-1基因的表达,ET-1基因在人前列腺癌细胞系中影响细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期和细胞侵袭、迁移的全过程。采用Western blot、细胞凋亡、caspase ... 

【文章来源】：武汉大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：98 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１?Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析ＬＮＣａｐ细胞系，ＰＣ３细胞系和ＤＵ１４５细胞系中ＥＴ－１蛋白表达??＊代表与对照相比显著性差异（Ｐ＜０．０５，?Ｔ检验）??１．３．２前列腺癌细胞ＰＣ３细胞系中ＥＴ－１敲低体系的建立??

为了下调ＰＣ－３细胞中的ＥＴ－１表达，我们设计了针对ＥＴ－１的ｓｉＲＮＡ。使用??ＥＴ－１?ｓｉＲＮＡ转染ＰＣ３细胞后进行Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析检测了?ＥＴ－１敲低后的表达量。??结果表明，ＥＴ－ｌｓｉＲＮＡ能有效降低ＥＴ－１的表达（图２Ａ和２Ｂ）。进一步，灰色??值分析也证实了实验组的ＥＴ＿１蛋白表达与对照组和空白组相比有显着性差异??（图２Ｂ）。因此，此后ＥＴ－ｌｓｉＲＮＡ被用于所有后续实验。??ｔ??１４??

焚光活化细胞分选仪（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?Ａｃｔｉｖａｔｅｄ?Ｃｅｌｌ?Ｓｏｒｔｅｒ，ＦＡＣＳ）结果表明，在??ＰＣ３细胞中敲低ＥＴ－１会引起Ｇ１和Ｇ２期细胞比例的上升（图４Ａ），而ＥＴ－１敲??低导致的Ｇ１期细胞比例上升与转染４８小时的细胞数减少（图３），表明了细胞??停滞在了?Ｇ１?／Ｇ２检查点（ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ）上。与两个对照组相比，ＥＴ－１敲低的ＰＣ３??细胞增殖被显著抑制长达４８小时。上述结果表明，ＥＴ－１敲除能通过阻止Ｇｌ?／?Ｇ２??细胞周期进程可以有效地抑制ＰＣ３细胞的细胞增殖。此外，与两个对照组相比，??ＥＴ－１?ｓｉＲＮＡ能导致凋亡细胞比例的显著增加，表明敲低ＥＴ－１可以促进凋亡的发??生（图４Ｂ）。??１６??

【参考文献】：
期刊论文
[1]前列腺癌中内皮素及其受体的研究进展[J]. 王青兵,渠武帅,秦大山,王志平.  中华男科学杂志. 2006(05)



本文编号：3298178