中国汉族帕金森病患者LRRK2基因变异分析及姜黄素对LRRK2 G2385R变异的保护作用
发布时间：2021-07-26 09:24
第一部分中国汉族帕金森病患者LRRK2基因变异分析目的:帕金森病（Parkinson’s disease,PD）的发病机制尚不明确,目前认为与遗传因素、环境因素及老化等因素交互作用相关,其中遗传因素越来越受到关注。富含亮氨酸重复序列激酶2（leucine-rich repeat kinase 2 gene,LRRK2）突变是PD患者常染色体显性遗传中最常见基因突变,在家族性及散发性PD患者中均起着重要作用。对PD患者LRRK2基因变异分析及临床特点研究有助于进一步探索PD发病机制。本研究目的是探索汉族PD患者LRRK2基因罕见变异情况,并研究LRRK2基因G2385R和R1628P两个常见多态位点与帕金森病发生之间潜在关联,探索LRRK2“基因型-表型”（genotype-phenotype）之间关联现象。方法:1.连续收集296例中国汉族PD患者血液标本,提取基因组DNA,对其进行全外显子测序及靶向测序,测序均包括LRRK2基因的51个外显子及外显子一内含子交接区。将测序PD患者中LRRK2基因变异位点与643名年龄、性别匹配的健康对照组 in-house data 及 1000 G...
【文章来源】：苏州大学江苏省 211工程院校
【文章页数】：128 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１．?ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞中转染ＬＲＲＫ２?Ｇ２３８５Ｒ质粒可致神经毒性
中国汉族帕金森病患者基因变异分析及姜黄素对Ｚ７？／＾２Ｇ２３８５Ｒ变异的保护作用?第二部分??Ｖｅｃｔ?ＬＲＲＫ２?ＷＴ?ＬＲＲＫ２?Ｇ２３８５Ｒ??Ｃｕｒ??ＰＭＨＳｉＢｉＨｉ?１５〇ｉ??Ｈ?ｓ?ｉｒ１ｌｉＩｉｎ?ｉＡ＊！１！?．?＊＊＊＊＊＊￡?ｎ?１０??？■■Ｂ?卜?ｌｌ＿＿??ｖｅｃｔ?Ｇ２３８５Ｒ??图４．１姜黄素对Ｇ２３８５Ｒ变异诱导神经毒性的保护作用。??姜黄素（Ｃｕｒｃｕｍｉｎ）浓度为?０．１ｕＭ，０．５ｕＭ，?ｌ．ＯｕＭ?作用于?ＳＨ－ＳＹ５Ｙ?细胞?ｌｈ，?ｌｈ??后转染Ｖｅｃｔ、ＬＲＲＫ２ＷＴ、ＬＲＲＫ２Ｇ２３８５Ｒ质粒，观察细胞（ＳＨ－ＳＹ５Ｙ）生存率（计??数轴突长度大ｆ？胞体长度２倍的细胞）。随着羞黄素浓度的堉加（０．１｜ａＭ、０．５ｐＭ、??１鄭Ｍ?），?２４小时后发现ＬＲＲＫ２?Ｇ２３８５Ｒ转染组细胞生存率呈浓度依赖性增加。ｎ＝３－４．??＊与未给药Ｖｅｃｔ组相比，＃与未给药Ｇ２３８５Ｒ组相比。Ｃｕｒ，姜黄素Ｃｕｒｃｕｍｉｎ；?＊，Ｐ＜０．０５；??Ｐ＜０．０１；?＊＊＊，＾＜０．００１；＾，?Ｐ＜０．０１〇??４．２?Ｒｏｓｃｏｖｉｔｉｎｅ对Ｇ２３８５Ｒ变异丨秀导神经＃性无明呆护作用??经过杳阅文献，Ｍ样在转染前１２ｈ，史换为相应浓度的含有Ｒｏｓｃｏｖｉｔｉｎｅ?（ＣＤＫ－５??抑制剂，浓度梯度设置为〇ＭＭ，０．５卜ｉＭ，ｌ｜ａＭ，?５＾Ｍ）的培养基孵育１２ｈ，１２ｈ只分別转??染?Ｖｅｃｔ、ＬＲＲＫ２?ＷＴ、ＬＲＲＫ２?Ｇ２３８５Ｒ?质粒二组（按照?ＧＦＰ?与?ＬＲＲＫ２?质粒比例?１：１５??进行转染），继续培养细胞４８ｈ。４８ｈ后Ｈ到置Ｖ微镜卜观察细胞形态。细胞生存牛
第二部分?中国汉族帕金森病患者基因变异分析及姜黄素对ＭＭ２?Ｇ２３８５Ｒ变异的保护作用??Ｖｅｃｔ?ＬＲＲＫ２?ＷＴ?ＬＲＲＫ２?Ｇ２３８５Ｒ??－■■■Ｈ１８１ＩＩ?ＩＢ??Ｖｅｃｔ?ＬＲＲＫ２?ＷＴ?ＬＲＲＫ２?Ｇ２３８５Ｒ??￥?■■■??图４．２?Ｒｏｓｃｏｖｉｔｉｎｅ对［／？／？尺２?Ｇ２３８５Ｒ变异诱导神经毒性无明显保护作用。??Ｒｏｓｃｏｖｉｔｉｎｅ?（ＣＤＫ－５?抑制剂）浓度为?０．１｜ｉＭ，０．５（ｉＭ，１．０｜＿ｉＭ?作用于?ＳＨ－ＳＹ５Ｙ?细??胞２４ｈ，２４ｈ后转染Ｖｅｃｔ、ＬＲＲＫ２?ＷＴ、ＬＲＲＫ２?Ｇ２３８５Ｒ三组的质粒（同样按照ＧＦＰ??与ＬＲＲＸ２质粒１：１５的比例进行转染），观察细胞（ＳＨ－ＳＹ５Ｙ）生存率（同样计数轴??突长度大于胞体长度２倍的健康细胞）。在各种Ｒｏｓｃｏｖｉｔｉｎｅ浓度下（０．５ｆｉＭ、ｌｐＭ、??５ｐＭ?），均未发现Ｒｏｓｃｏｖｉｔｉｎｅ有对Ｇ２３８５Ｒ变异诱导神经毒性的保护作用。??ｎ＝３－４．?Ｒｏｓ：?Ｒｏｓｃｏｖｉｔｉｎｅ．??４．３?Ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅ?Ｄ不改变尺２?Ｇ２３８５Ｒ变异诱导神经毒性作用??在ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞转染前１２ｈ，更换培养基为相应浓度的含有Ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅ?Ｄ?（微管??稳定剂，浓度梯度设置为０ｍＭ，１０｜＿ｉＭ，?２５｜ａＭ，５０｜ｉＭ）的Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ培养基孵育１２ｈ，??１２ｈ后转染在ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞中二组Ｖｅｃｔ、ＬＲＲＫ２ＷＴ、ＬＲＲＫ２Ｇ２３８５Ｒ质粒，继续??培养细胞４８ｈ。４８ｈ后于倒置显微镜下观察细胞形态。以同样的方法计算细胞生存率。??我们的结果显示，在所有浓度梯度下（１０ｎＭ、２５ｎＭ、５０ｎＭ）
本文编号：3303294
【文章来源】：苏州大学江苏省 211工程院校
【文章页数】：128 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１．?ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞中转染ＬＲＲＫ２?Ｇ２３８５Ｒ质粒可致神经毒性
中国汉族帕金森病患者基因变异分析及姜黄素对Ｚ７？／＾２Ｇ２３８５Ｒ变异的保护作用?第二部分??Ｖｅｃｔ?ＬＲＲＫ２?ＷＴ?ＬＲＲＫ２?Ｇ２３８５Ｒ??Ｃｕｒ??ＰＭＨＳｉＢｉＨｉ?１５〇ｉ??Ｈ?ｓ?ｉｒ１ｌｉＩｉｎ?ｉＡ＊！１！?．?＊＊＊＊＊＊￡?ｎ?１０??？■■Ｂ?卜?ｌｌ＿＿??ｖｅｃｔ?Ｇ２３８５Ｒ??图４．１姜黄素对Ｇ２３８５Ｒ变异诱导神经毒性的保护作用。??姜黄素（Ｃｕｒｃｕｍｉｎ）浓度为?０．１ｕＭ，０．５ｕＭ，?ｌ．ＯｕＭ?作用于?ＳＨ－ＳＹ５Ｙ?细胞?ｌｈ，?ｌｈ??后转染Ｖｅｃｔ、ＬＲＲＫ２ＷＴ、ＬＲＲＫ２Ｇ２３８５Ｒ质粒，观察细胞（ＳＨ－ＳＹ５Ｙ）生存率（计??数轴突长度大ｆ？胞体长度２倍的细胞）。随着羞黄素浓度的堉加（０．１｜ａＭ、０．５ｐＭ、??１鄭Ｍ?），?２４小时后发现ＬＲＲＫ２?Ｇ２３８５Ｒ转染组细胞生存率呈浓度依赖性增加。ｎ＝３－４．??＊与未给药Ｖｅｃｔ组相比，＃与未给药Ｇ２３８５Ｒ组相比。Ｃｕｒ，姜黄素Ｃｕｒｃｕｍｉｎ；?＊，Ｐ＜０．０５；??Ｐ＜０．０１；?＊＊＊，＾＜０．００１；＾，?Ｐ＜０．０１〇??４．２?Ｒｏｓｃｏｖｉｔｉｎｅ对Ｇ２３８５Ｒ变异丨秀导神经＃性无明呆护作用??经过杳阅文献，Ｍ样在转染前１２ｈ，史换为相应浓度的含有Ｒｏｓｃｏｖｉｔｉｎｅ?（ＣＤＫ－５??抑制剂，浓度梯度设置为〇ＭＭ，０．５卜ｉＭ，ｌ｜ａＭ，?５＾Ｍ）的培养基孵育１２ｈ，１２ｈ只分別转??染?Ｖｅｃｔ、ＬＲＲＫ２?ＷＴ、ＬＲＲＫ２?Ｇ２３８５Ｒ?质粒二组（按照?ＧＦＰ?与?ＬＲＲＫ２?质粒比例?１：１５??进行转染），继续培养细胞４８ｈ。４８ｈ后Ｈ到置Ｖ微镜卜观察细胞形态。细胞生存牛
第二部分?中国汉族帕金森病患者基因变异分析及姜黄素对ＭＭ２?Ｇ２３８５Ｒ变异的保护作用??Ｖｅｃｔ?ＬＲＲＫ２?ＷＴ?ＬＲＲＫ２?Ｇ２３８５Ｒ??－■■■Ｈ１８１ＩＩ?ＩＢ??Ｖｅｃｔ?ＬＲＲＫ２?ＷＴ?ＬＲＲＫ２?Ｇ２３８５Ｒ??￥?■■■??图４．２?Ｒｏｓｃｏｖｉｔｉｎｅ对［／？／？尺２?Ｇ２３８５Ｒ变异诱导神经毒性无明显保护作用。??Ｒｏｓｃｏｖｉｔｉｎｅ?（ＣＤＫ－５?抑制剂）浓度为?０．１｜ｉＭ，０．５（ｉＭ，１．０｜＿ｉＭ?作用于?ＳＨ－ＳＹ５Ｙ?细??胞２４ｈ，２４ｈ后转染Ｖｅｃｔ、ＬＲＲＫ２?ＷＴ、ＬＲＲＫ２?Ｇ２３８５Ｒ三组的质粒（同样按照ＧＦＰ??与ＬＲＲＸ２质粒１：１５的比例进行转染），观察细胞（ＳＨ－ＳＹ５Ｙ）生存率（同样计数轴??突长度大于胞体长度２倍的健康细胞）。在各种Ｒｏｓｃｏｖｉｔｉｎｅ浓度下（０．５ｆｉＭ、ｌｐＭ、??５ｐＭ?），均未发现Ｒｏｓｃｏｖｉｔｉｎｅ有对Ｇ２３８５Ｒ变异诱导神经毒性的保护作用。??ｎ＝３－４．?Ｒｏｓ：?Ｒｏｓｃｏｖｉｔｉｎｅ．??４．３?Ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅ?Ｄ不改变尺２?Ｇ２３８５Ｒ变异诱导神经毒性作用??在ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞转染前１２ｈ，更换培养基为相应浓度的含有Ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅ?Ｄ?（微管??稳定剂，浓度梯度设置为０ｍＭ，１０｜＿ｉＭ，?２５｜ａＭ，５０｜ｉＭ）的Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ培养基孵育１２ｈ，??１２ｈ后转染在ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞中二组Ｖｅｃｔ、ＬＲＲＫ２ＷＴ、ＬＲＲＫ２Ｇ２３８５Ｒ质粒，继续??培养细胞４８ｈ。４８ｈ后于倒置显微镜下观察细胞形态。以同样的方法计算细胞生存率。??我们的结果显示，在所有浓度梯度下（１０ｎＭ、２５ｎＭ、５０ｎＭ）
本文编号：3303294
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