茶树炭疽病病原菌的绿色荧光蛋白基因标记及其侵染研究

发布时间：2021-07-29 22:30

　　茶炭疽病是茶树上的叶部病害之一,在茶树上发生严重时会导致茶叶品质和质量的下降,造成一定的经济损失。本研究以根癌农杆菌GFP基因表达载体质粒EGFP-PSK2251和一株茶胶孢炭疽菌（GZCC20-0218）为材料,通过根癌农杆菌介导转化的方法,构建茶胶孢炭疽菌的遗传转化体系,筛选获得稳定遗传的转化子。利用荧光显微镜技术揭示转化子在叶片组织内定殖的特点。研究结果表明:根癌农杆菌与茶胶孢炭疽菌的分生孢子在26℃,0.2 mol/L乙酰丁香酮（AS）诱导下得到转化子。对转化子进行绿色荧光检测、分子验证及遗传稳定性测定后,从而获得稳定遗传的绿色荧光蛋白（GFP）标记菌株。同时,试验表明GFP标记菌株仍具有致病性。GFP标记菌株进行茶叶侵染试验时,7 d后茶叶发病率达到100%。发病叶片进行组织切片观察,发现胶孢炭疽菌的分生孢子可以在叶片的气孔和叶片组织内定殖。 

【文章来源】：基因组学与应用生物学. 2020,39(08)北大核心CSCD

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【部分图文】：

GFP菌的分生孢子液接种茶苗后的处理部位

本实验所用的根癌农杆菌中含有的质粒EGFP-PSK2251同时携带GFP基因、潮霉素B抗性基因(潮霉素磷酸转移酶基因)及卡那霉素抗性基因，通过PCR扩增验证质粒中的潮霉素B抗性基因，从而证明绿色荧光蛋白基因的存在。试验结果表明：凝胶电泳条带在750 bp左右(图2)，与预期的目的条带一致，质粒中潮霉素B抗性基因稳定的存在根癌农杆菌中，同时说明荧光蛋白基因也稳定的存在根癌农杆菌中。1.3 胶孢炭疽菌对Hyg B的敏感度分析

荧光显微镜下观察到转化子的菌丝及其产生的分生孢子均能发出较强的绿色荧光(图4)，将其保存备用。图3 不同浓度潮霉素B对GZCC20-0218的生长抑制情况


本文编号：3310178