组蛋白乙酰化/去乙酰化失衡对平面细胞极性途径关键基因影响的研究
发布时间：2021-07-30 14:21
目的观察组蛋白乙酰化/去乙酰化失衡对胎鼠心脏的致畸作用及对H9C2心肌细胞平面细胞极性（PCP）途径关键基因Vangl2、Scrib、Rac1表达的影响。方法将40只C57/B6孕小鼠随机分为空白对照组（n=10）、溶剂对照组（n=10）和丙戊酸（VPA）组（n=20）;应用组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂VPA单次剂量700 mg/kg腹腔注射妊娠第10.5天（E10.5 d）VPA组孕鼠,溶剂对照组孕鼠腹腔注射等量生理盐水,空白对照组不做任何处理。于E15.5 d处死孕鼠,统计死胎率;取活胎鼠心脏行苏木精-伊红（HE）染色,观察VPA对胎鼠心脏的致畸作用。培养H9C2心肌细胞并将其分为空白对照组、溶剂对照组和VPA组,VPA组以不同浓度（2.0、4.0、8.0 mmol/L）作用于H9C2心肌细胞,溶剂对照组加入等量生理盐水,空白对照组不进行任何处理。实时荧光定量PCR和Western blot检测HDAC13及Vangl2、Scrib、Rac1基因在VPA干预后24、48、72 h mRNA及其蛋白表达水平;比色法测定总HDAC活性变化。结果 VPA组胎鼠...
【文章来源】：中国当代儿科杂志. 2017,19(04)北大核心CSCD
【文章页数】：9 页
【部分图文】：
VPA致胎鼠心脏发育异常（苏木精-伊红染色）[LA]左心房；RA[右心房]；[LV]左心室；[RV]右心室；[IVS]室间隔；[VSD]室间隔缺损；[AO]主动脉；[PA]肺动脉；[TV]三尖瓣；[MV]二尖瓣
第19卷第4期2017年4月中国当代儿科杂志ChinJContempPediatrVol.19No.4Apr.2017·480·1.51.00.501.51.00.502.01.51.00.50图2各组HDACsmRNA及蛋白表达水平比较（n=3）A~C：VPA干预对HDAC1mRNA及蛋白水平的影响；D~F：VPA干预对HDAC2mRNA及蛋白水平的影响；G~I：VPA干预对HDAC3mRNA及蛋白水平的影响。a示与空白及溶剂对照组比较，P<0.05。2.3VPA对H9C2细胞PCP关键分子mRNA及蛋白表达水平的影响与空白及溶剂对照组相比，Vangl2及ScribmRNA表达水平于不同浓度VPA干预后48h及72h均显著下降（P<0.05）；Vangl2蛋白表达水平于干预后72h显著下降（P<0.05）；Scrib蛋白表达水平于干预后48h及72h均显著下调（P<0.05）。Rac1mRNA及蛋白表达水平与空白及溶剂对照组比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。不同浓度VPA干预组间，于各时间点分别比较差异均无统计学意义（P>0.05）。见图3。2.4VPA对H9C2细胞总HDAC活性的影响与空白及溶剂对照组比较，VPA4.0、8.0mmol/L干预后24h，总HDAC活性显著降低（P<0.05），而2.0mmol/LVPA干预组较空白及溶剂对照组总HDAC活性无显著变化（P>0.05）；干预后48h及72h，3个剂量VPA干预组总HDAC活性均显著低于空白及溶剂对照组（P<0.05）。不同浓度VPA干预组间，于各时间点分别比较差异均无统计学意义（P>0.05）。见图4。ABCEFGHID8.06.04.02.002.01.51.00.508.06.04.02.00/DAC1HGAPDHRNAm/DAC2HGAPDHRNAm/DAC3HGAPDHRNAm/DAC1HGAPDH/DAC2HGAPDH/DAC3HGAPDHaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa24h48h72h24h48h72h24h48h72h24h48h72h24h
第19卷第4期2017年4月中国当代儿科杂志ChinJContempPediatrVol.19No.4Apr.2017·481·3讨论胚胎心脏正常发育需要众多基因在不同时间和空间顺次精确表达，如果这些关键基因表达图3各组PCP关键分子mRNA及蛋白表达水平比较（n=3）A~C：VPA干预对Vangl2mRNA及蛋白水平的影响；D~F：VPA干预对ScribmRNA及蛋白水平的影响；G~I：VPA干预对Rac1mRNA及蛋白水平的影响。a示与空白及溶剂对照组比较，P<0.05。图4各组总HDAC活性比较（n=3）a示与空白及溶剂对照组比较，P<0.05。异常，将不同程度干扰胚胎心脏的分子调控程序化进程，最终导致CHD的发生。PCP途径中的Vangl2、Scrib及Rac1是与心脏早期发育密切相关的3种关键蛋白，其表达缺失将干扰“心肌化”过程，引起心脏发育异常：Vangl2参与心室肌与流出道的发育，基因突变致胎鼠心肌细胞分化异常，不能伸出板状和丝状伪足，细胞极化、迁移受抑制[8]；Scrib与心肌细胞间黏附有关，表达缺失可致心脏袢化异常、VSD、心室壁变薄及心肌致密化不全[9]；Rac1缺失可导致心肌细胞变为球形、心室小梁化异常、细胞凋亡增加[10]。因此，进一步研究PCP关键分子的表达及调控，成为CHD病因探讨中的关键问题。近年研究显示，表观遗传学修饰调控着不同环境下基因的表达模式，是外界环境改变致疾病发生、发展的关键机制。表观遗传学修饰所致的ABCEFGHID2.01.51.00.508.06.04.02.002.01.51.00.501.51.00.501.00.80.60.40.200.80.60.40.201.51.00.50/ang12VGAPDHRNAm/cribSGAPDHRNAmGac1/RAPDHRNAmDACH性活[μol/（Lm·μg白）蛋]ac1/GAPRHD/cribSGAPDH/ang12VGAPDHaaa
【参考文献】：
期刊论文
[1]组蛋白乙酰化/去乙酰化失衡对C2C12肌原细胞成肌分化的影响[J]. 李一飞,华益民,方婕,王川,詹雅兰,朱琦,母得志,周开宇. 中华妇幼临床医学杂志(电子版). 2014(05)
[2]HDACs,histone deacetylation and gene transcription: from molecular biology to cancer therapeutics[J]. PaolaGallinari,StefaniaDiMarco,PhillipJones,MichelePallaoro,ChristianSteinkühler. Cell Research. 2007(03)
本文编号：3311566
【文章来源】：中国当代儿科杂志. 2017,19(04)北大核心CSCD
【文章页数】：9 页
【部分图文】：
VPA致胎鼠心脏发育异常（苏木精-伊红染色）[LA]左心房；RA[右心房]；[LV]左心室；[RV]右心室；[IVS]室间隔；[VSD]室间隔缺损；[AO]主动脉；[PA]肺动脉；[TV]三尖瓣；[MV]二尖瓣
第19卷第4期2017年4月中国当代儿科杂志ChinJContempPediatrVol.19No.4Apr.2017·480·1.51.00.501.51.00.502.01.51.00.50图2各组HDACsmRNA及蛋白表达水平比较（n=3）A~C：VPA干预对HDAC1mRNA及蛋白水平的影响；D~F：VPA干预对HDAC2mRNA及蛋白水平的影响；G~I：VPA干预对HDAC3mRNA及蛋白水平的影响。a示与空白及溶剂对照组比较，P<0.05。2.3VPA对H9C2细胞PCP关键分子mRNA及蛋白表达水平的影响与空白及溶剂对照组相比，Vangl2及ScribmRNA表达水平于不同浓度VPA干预后48h及72h均显著下降（P<0.05）；Vangl2蛋白表达水平于干预后72h显著下降（P<0.05）；Scrib蛋白表达水平于干预后48h及72h均显著下调（P<0.05）。Rac1mRNA及蛋白表达水平与空白及溶剂对照组比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。不同浓度VPA干预组间，于各时间点分别比较差异均无统计学意义（P>0.05）。见图3。2.4VPA对H9C2细胞总HDAC活性的影响与空白及溶剂对照组比较，VPA4.0、8.0mmol/L干预后24h，总HDAC活性显著降低（P<0.05），而2.0mmol/LVPA干预组较空白及溶剂对照组总HDAC活性无显著变化（P>0.05）；干预后48h及72h，3个剂量VPA干预组总HDAC活性均显著低于空白及溶剂对照组（P<0.05）。不同浓度VPA干预组间，于各时间点分别比较差异均无统计学意义（P>0.05）。见图4。ABCEFGHID8.06.04.02.002.01.51.00.508.06.04.02.00/DAC1HGAPDHRNAm/DAC2HGAPDHRNAm/DAC3HGAPDHRNAm/DAC1HGAPDH/DAC2HGAPDH/DAC3HGAPDHaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa24h48h72h24h48h72h24h48h72h24h48h72h24h
第19卷第4期2017年4月中国当代儿科杂志ChinJContempPediatrVol.19No.4Apr.2017·481·3讨论胚胎心脏正常发育需要众多基因在不同时间和空间顺次精确表达，如果这些关键基因表达图3各组PCP关键分子mRNA及蛋白表达水平比较（n=3）A~C：VPA干预对Vangl2mRNA及蛋白水平的影响；D~F：VPA干预对ScribmRNA及蛋白水平的影响；G~I：VPA干预对Rac1mRNA及蛋白水平的影响。a示与空白及溶剂对照组比较，P<0.05。图4各组总HDAC活性比较（n=3）a示与空白及溶剂对照组比较，P<0.05。异常，将不同程度干扰胚胎心脏的分子调控程序化进程，最终导致CHD的发生。PCP途径中的Vangl2、Scrib及Rac1是与心脏早期发育密切相关的3种关键蛋白，其表达缺失将干扰“心肌化”过程，引起心脏发育异常：Vangl2参与心室肌与流出道的发育，基因突变致胎鼠心肌细胞分化异常，不能伸出板状和丝状伪足，细胞极化、迁移受抑制[8]；Scrib与心肌细胞间黏附有关，表达缺失可致心脏袢化异常、VSD、心室壁变薄及心肌致密化不全[9]；Rac1缺失可导致心肌细胞变为球形、心室小梁化异常、细胞凋亡增加[10]。因此，进一步研究PCP关键分子的表达及调控，成为CHD病因探讨中的关键问题。近年研究显示，表观遗传学修饰调控着不同环境下基因的表达模式，是外界环境改变致疾病发生、发展的关键机制。表观遗传学修饰所致的ABCEFGHID2.01.51.00.508.06.04.02.002.01.51.00.501.51.00.501.00.80.60.40.200.80.60.40.201.51.00.50/ang12VGAPDHRNAm/cribSGAPDHRNAmGac1/RAPDHRNAmDACH性活[μol/（Lm·μg白）蛋]ac1/GAPRHD/cribSGAPDH/ang12VGAPDHaaa
【参考文献】：
期刊论文
[1]组蛋白乙酰化/去乙酰化失衡对C2C12肌原细胞成肌分化的影响[J]. 李一飞,华益民,方婕,王川,詹雅兰,朱琦,母得志,周开宇. 中华妇幼临床医学杂志(电子版). 2014(05)
[2]HDACs,histone deacetylation and gene transcription: from molecular biology to cancer therapeutics[J]. PaolaGallinari,StefaniaDiMarco,PhillipJones,MichelePallaoro,ChristianSteinkühler. Cell Research. 2007(03)
本文编号：3311566
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3311566.html
最近更新
教材专著
