维生素A修饰的纳米载体靶向肝星状细胞沉默TLR4基因并抑制其激活的体外实验研究

发布时间：2021-07-31 03:37

　　目的制备由维生素A（VA）修饰的纳米载体聚乙二醇（PEG）-聚乙烯亚胺（PEI）,用于靶向肝星状细胞（HSC）（LX-2细胞株）输送Toll样受体（TLR）4小干扰RNA（siRNA）。观察和评估VA-PEGPEI对LX-2细胞转染效率、TLR4/核因子（NF）-κB信号通路和α-平滑肌肌动蛋白（SMA）表达的影响。方法采用细胞计数试剂盒（CCK）-8检测纳米基因药物细胞毒性。通过流式细胞术和荧光显微镜观察纳米药物转染效率。脂多糖（LPS）刺激LX-2细胞,并用不同多聚体[VA-PEG-PEI/TLR4 siRNA（siTLR4）或PEG-PEI/siTLR4]进行转染。蛋白质印迹法（WB）和免疫荧光法分别检测LX-2细胞TLR4/NF-κB信号通路蛋白水平和α-SMA表达。结果高浓度（40μg/mL）VA-PEG-PEI/siTLR4孵育下LX-2细胞仍具有80%以上存活率,表明纳米药物细胞毒性较低。LPS刺激的LX-2细胞TLR4/NF-κB信号通路水平升高,这种作用经VA-PEG-PEI/siTLR4处理后显著减弱。同时,VA-PEG-PEI/siTLR4能有效地使LX-2细胞失... 

【文章来源】：介入放射学杂志. 2020,29(10)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

纳米聚合物VA-PEG-PEI合成线路

最终合成的聚合物VA-PEG-PEI通过核磁共振氢谱表征，其1H波谱图见图2。其中5.37 ppm峰（a）为VA双键基团质子特征峰，3.6 ppm附近的峰（b）为PEG特征峰，1.8 ppm和1.2 ppm峰为PEI特征基团，而7.3 ppm峰为氘代氯仿的溶剂峰，以三甲基硅烷（TMS）为内标（0 ppm）。所合成的聚合物VA-PEG-PEI在其每一个嵌段部分均有标志性特征峰，证明该聚合物成功合成。纳米粒径分析仪检测不同N/P比时VA-PEG-PEI/SCR粒径分布和Zeta电位结果显示，随着N/P比逐渐增加，复合物粒径逐渐缩小，N/P比增大至8时粒径达最小（125.0±3.2) nm，而后趋于稳定；Zeta电位随N/P比增大逐渐增高，N/P比为8时Zeta电位为（10.2±1.0) m V，见图3。因此，N/P比为8时，复合物具有合适粒径和弱正电位，有利于细胞摄取、吸收，适合进行后续实验。

琼脂糖凝胶阻滞电泳试验结果显示，随着N/P比逐渐增大，si RNA条带逐渐减弱，直至消失；VA-PEG-PEI组、PEG-PEI组N/P比分别为≥8、≥6时，si RNA条带完全消失，说明在si RNA完全被载体复合；其中VA靶向修饰后PEG-PEI复合si RNA能力较未修饰PEG-PEI稍有减弱，但仍有良好的si RNA负载能力，见图4。图4 纳米复合物在不同N/P比凝胶阻滞电泳试验结果


本文编号：3312690