家蚕翅发育相关基因的功能分析

发布时间：2021-08-04 10:03

　　昆虫是地球上种群最多且唯一有翅的无脊椎动物。翅的产生不仅有利于昆虫觅食、躲避敌害、扩大分布范围,而且翅对于某些昆虫的求偶、交配等行为具有必不可少的重要作用。家蚕属于鳞翅目昆虫,同时又是重要的模式昆虫,但是对家蚕的翅发育机制的研究仍然存在一些未知的问题。本研究主要从两个方向对调控家蚕翅发育的基因进行了研究和功能验证。首先从正向遗传学的方向出发,利用STS分子定位技术,将家蚕雏翅突变的基因（mw）定位于第22号染色体上的275kb的范围内。通过比对在定位的275kb的区域内,一共存在15个候选基因。通过对这15个基因在mRNA水平的表达分析,基因Bmapp在翅原基中具有很高的表达,同时在突变体和野生型中存在明显的表达差异,因此推测Bmapp可能是导致雏翅表型的关键基因。之后利用CRISPR/Cas9系统,对家蚕早期胚胎直接注射体外合成的Cas9mRNA和针对Bmapp的特异的sgRNA混合物,从而获得了敲除Bmapp的突变体家蚕。在Bmapp突变体家蚕中,家蚕翅发育异常,与雏翅突变体相似,因此确定Bmapp是雏翅突变的关键基因。通过对雏翅突变体和野生型家蚕Bmapp基因顺式调控元件的比较发... 

【文章来源】：江苏科技大学江苏省

【文章页数】：84 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 绪论
    1.1 昆虫的翅发育的研究
        1.1.1 果蝇的翅发育的研究
        1.1.2 家蚕的翅发育的研究
    1.2 参与翅发育调控的相关信号通路的研究
    1.3 家蚕翅发育机制的研究现状
        1.3.1 利用正向遗传技术对家蚕翅发育的研究
        1.3.2 利用反向遗传技术对家蚕翅发育的研究
    1.4 本研究的主要内容和结果
第2章 家蚕雏翅基因(mw)的定位与功能分析
    2.1 引言
    2.2 实验技术路线
    2.3 材料与方法
        2.3.1 材料
        2.3.2 主要药品、试剂和试验仪器
        2.3.3 实验方法
    2.4 结果与分析
        2.4.1 雏翅突变候选基因的定位与表达谱构建
        2.4.2 雏翅突变基因Bmapp的验证
        2.4.3 Bmapp启动子的突变导致雏翅的产生
        2.4.4 Bmapp敲除影响Hippo通路基因的表达
    2.5 讨论
    2.6 本章小结
第3章 家蚕Hedgehog基因的功能分析
    3.1 引言
    3.2 材料和方法
        3.2.1 材料
        3.2.2 主要药品、试剂和试验仪器
        3.2.3 实验方法
    3.3 结果与讨论
        3.3.1 转基因家蚕的获得
        3.3.2 BmHh突变表型观察
        3.3.3 BmHh靶点突变检测
        3.3.4 Hedgehog信号通路基因表达的检测
    3.4 本章小结
结论
参考文献
附录
攻读硕士学位期间发表的学术论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]利用STS标记对家蚕雏翅基因mw的定位分析[J]. 马晓,刘先方,易晓莉,侯成香,李冰,李木旺.  蚕业科学. 2013(06)



本文编号：3321500