家蚕山梨醇脱氢酶基因与蜕皮激素合成途径基因Shadow的功能研究
发布时间：2021-08-07 03:11
家蚕（Bombyx mori）是重要的经济昆虫和鳞翅目模式生物。滞育和变态发育是家蚕重要的特性,其分子机制的研究一直是蚕业科学领域的难点和热点,迄今仍未完全阐明。家蚕是典型的卵滞育昆虫,根据其在自然条件下1年发生的世代数可分为一化性、二化性和多化性,根据幼虫期眠或蜕皮的次数又可分为三眠蚕、四眠蚕和五眠蚕。为深入了解家蚕山梨醇脱氢酶基因BmSDH的特性、蜕皮激素合成途径（Ecdysteroidogenic Pathway,EP）Shadow基因在滞育和变态发育中的作用,本文以家蚕二化性品种秋丰为材料,利用5’RACE、qRT-PCR和CRISPR/Cas9等技术,研究BmSDH与Shadow基因的功能,取得以下主要结果。1.家蚕山梨醇脱氢酶基因的转录起始位点确定及启动子结构分析。用5′RACE技术确定BmSDH基因的转录起始位点;利用NNPP、JASPAR、Alibaba2.1等在线软件对转录起始位点上游2 kb及下游200 bp序列进行分析。结果表明,BmSDH-1的转录起始位点为A（-41）,BmSDH-2a的转录起始位点为C（-41）,BmSDH-2b的转录起始位点为A（-40）（...
【文章来源】：江苏科技大学江苏省
【文章页数】：106 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
泛色素合成途径[20]
图 1.2 果蝇变态发育过程中蜕皮激素信号转导途径[60]Fig 1.2 The signal transduction pathways of 20- E during metamorphosis in fruitfly[60]1.5 基因编辑研究进展1.5.1 基因组编辑技术概述通过核酸酶对目标 DNA 进行定点敲除、敲入以及突变等操作，最终使目标基因的表达水平下调或上调，使得细胞或个体得到一个新的表型目标，这样的技术我们称之为基因编辑。传统的基因操作由于效率低、精确度差等问题，严重滞后于基因组研究的进展。近年来，新发展的基因编辑方法有锌指核酸酶技术、TALEN 技术和CRISPR/Cas 技术等通过特异性识别，可以达到精确切割基因组 DNA 序列的效果，同时诱发同源重组或非同源末端链接[61]。这些技术已被广泛运用于基因结构与功能的研究和多种细胞的基因工程改造，为疾病模型的建立、动植物新品种的培育及基因治疗等的研究提供新的手段。ZFNs、TALENs 和 CRISPR/Cas9 系统皆是通过在特定的靶位点处切割双链，形
图 1.3 ZFN、TALEN 和 CRISPR/Cas9 基因编辑的原理[62]Fig 1.3 the principle of ZFN, TALEN and CRISPR/Cas9[62]结构与分类细菌基因组广泛存在 CRISPR 簇家族序列，作为防御外源目前在 40 %的已测序细菌和 90 %的已测序古细菌中都有主要由多个高度保守重复约为 25-50 bp 长度的序列和间PR 位点中的重复序列保守性较高，尤其在 5’端与 3’ 端的 CRISPR 序列包含的间隔序列的数量差别很大，少至/Cas 系统可以分为 Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型 3 大类：Ⅰ型和Ⅲ切割与降解必需两种以上的Cas蛋白参与；而Ⅱ型系统只DNA 双链，组分较为简单，实验设计也较为方便除体系应该包含有 Cas9 和 gRNA 2 个元件，在这里 Cas 和破坏双链 DNA，而决定 CRISPR/Cas9 系统在应用时 C于 gRNA 5'端的大约 20 bp 的序列，该序列决定了 CRIS
【参考文献】：
期刊论文
[1]利用CRISPR/Cas9技术构建AEG-1基因敲除U251细胞系并探讨其转移行为的特点[J]. 盛玉瑞,李斌,王斌,左娣,马琳,任晓璠,郭乐,刘昆梅. 中国生物工程杂志. 2018(10)
[2]家蚕滞育关联山梨醇脱氢酶基因的启动子活性分析[J]. 朱娟,谢雨辰,陈艳荣,唐顺明,易咏竹,沈兴家. 昆虫学报. 2018(04)
[3]基因编辑技术[J]. 胡小丹,游敏,罗文新. 中国生物化学与分子生物学报. 2018(03)
[4]基于CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术研究进展[J]. 尹畅. 科技视界. 2017(02)
[5]CRISPR/Cas9[J]. 杨丽. 中南医学科学杂志. 2016(05)
[6]家蚕2龄不眠蚕突变体的发现及遗传特性分析[J]. 赵巧玲,吴凡,夏定国,裘智勇,沈兴家. 蚕业科学. 2015(03)
[7]CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术研究进展[J]. 李聪,曹文广. 生物工程学报. 2015(11)
[8]基因编辑技术在基因治疗中的应用进展[J]. 季海艳,朱焕章. 生命科学. 2015(01)
[9]家蚕滞育机理研究进展[J]. 刘玫静,童晓玲,张高军. 蚕学通讯. 2014(04)
[10]利用优化的5′-RACE实验定位副溶血弧菌基因的转录起始位点[J]. 李杰,张义全,高鹤,王丽,胡小许,周冬生. 生物技术通讯. 2014(03)
博士论文
[1]家蚕防御球孢白僵菌感染相关免疫基因的研究[D]. 吕丁丁.江苏科技大学 2017
[2]家蚕新突变体二龄不眠蚕基因的定位克隆及功能研究[D]. 吴凡.江苏科技大学 2016
[3]Homeodomain转录因子对家蚕保幼激素及蜕皮激素合成的调控[D]. 孟勐.西南大学 2015
[4]CRISPR/Cas9基因敲除技术在家蚕基因功能研究中的应用[D]. 辛虎虎.浙江大学 2015
[5]家蚕细胞色素P450基因及其定量方法的研究[D]. 卫正国.苏州大学 2009
[6]家蚕（Bombyx mori）全基因组细胞色素P450基因结构与进化分析及CYP18A1克隆与功能研究[D]. 艾均文.西南大学 2008
[7]棉铃虫细胞色素P450的诱导、纯化及其性质研究[D]. 郑明奇.中国农业大学 2003
本文编号：3326963
【文章来源】：江苏科技大学江苏省
【文章页数】：106 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
泛色素合成途径[20]
图 1.2 果蝇变态发育过程中蜕皮激素信号转导途径[60]Fig 1.2 The signal transduction pathways of 20- E during metamorphosis in fruitfly[60]1.5 基因编辑研究进展1.5.1 基因组编辑技术概述通过核酸酶对目标 DNA 进行定点敲除、敲入以及突变等操作，最终使目标基因的表达水平下调或上调，使得细胞或个体得到一个新的表型目标，这样的技术我们称之为基因编辑。传统的基因操作由于效率低、精确度差等问题，严重滞后于基因组研究的进展。近年来，新发展的基因编辑方法有锌指核酸酶技术、TALEN 技术和CRISPR/Cas 技术等通过特异性识别，可以达到精确切割基因组 DNA 序列的效果，同时诱发同源重组或非同源末端链接[61]。这些技术已被广泛运用于基因结构与功能的研究和多种细胞的基因工程改造，为疾病模型的建立、动植物新品种的培育及基因治疗等的研究提供新的手段。ZFNs、TALENs 和 CRISPR/Cas9 系统皆是通过在特定的靶位点处切割双链，形
图 1.3 ZFN、TALEN 和 CRISPR/Cas9 基因编辑的原理[62]Fig 1.3 the principle of ZFN, TALEN and CRISPR/Cas9[62]结构与分类细菌基因组广泛存在 CRISPR 簇家族序列，作为防御外源目前在 40 %的已测序细菌和 90 %的已测序古细菌中都有主要由多个高度保守重复约为 25-50 bp 长度的序列和间PR 位点中的重复序列保守性较高，尤其在 5’端与 3’ 端的 CRISPR 序列包含的间隔序列的数量差别很大，少至/Cas 系统可以分为 Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型 3 大类：Ⅰ型和Ⅲ切割与降解必需两种以上的Cas蛋白参与；而Ⅱ型系统只DNA 双链，组分较为简单，实验设计也较为方便除体系应该包含有 Cas9 和 gRNA 2 个元件，在这里 Cas 和破坏双链 DNA，而决定 CRISPR/Cas9 系统在应用时 C于 gRNA 5'端的大约 20 bp 的序列，该序列决定了 CRIS
【参考文献】：
期刊论文
[1]利用CRISPR/Cas9技术构建AEG-1基因敲除U251细胞系并探讨其转移行为的特点[J]. 盛玉瑞,李斌,王斌,左娣,马琳,任晓璠,郭乐,刘昆梅. 中国生物工程杂志. 2018(10)
[2]家蚕滞育关联山梨醇脱氢酶基因的启动子活性分析[J]. 朱娟,谢雨辰,陈艳荣,唐顺明,易咏竹,沈兴家. 昆虫学报. 2018(04)
[3]基因编辑技术[J]. 胡小丹,游敏,罗文新. 中国生物化学与分子生物学报. 2018(03)
[4]基于CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术研究进展[J]. 尹畅. 科技视界. 2017(02)
[5]CRISPR/Cas9[J]. 杨丽. 中南医学科学杂志. 2016(05)
[6]家蚕2龄不眠蚕突变体的发现及遗传特性分析[J]. 赵巧玲,吴凡,夏定国,裘智勇,沈兴家. 蚕业科学. 2015(03)
[7]CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术研究进展[J]. 李聪,曹文广. 生物工程学报. 2015(11)
[8]基因编辑技术在基因治疗中的应用进展[J]. 季海艳,朱焕章. 生命科学. 2015(01)
[9]家蚕滞育机理研究进展[J]. 刘玫静,童晓玲,张高军. 蚕学通讯. 2014(04)
[10]利用优化的5′-RACE实验定位副溶血弧菌基因的转录起始位点[J]. 李杰,张义全,高鹤,王丽,胡小许,周冬生. 生物技术通讯. 2014(03)
博士论文
[1]家蚕防御球孢白僵菌感染相关免疫基因的研究[D]. 吕丁丁.江苏科技大学 2017
[2]家蚕新突变体二龄不眠蚕基因的定位克隆及功能研究[D]. 吴凡.江苏科技大学 2016
[3]Homeodomain转录因子对家蚕保幼激素及蜕皮激素合成的调控[D]. 孟勐.西南大学 2015
[4]CRISPR/Cas9基因敲除技术在家蚕基因功能研究中的应用[D]. 辛虎虎.浙江大学 2015
[5]家蚕细胞色素P450基因及其定量方法的研究[D]. 卫正国.苏州大学 2009
[6]家蚕（Bombyx mori）全基因组细胞色素P450基因结构与进化分析及CYP18A1克隆与功能研究[D]. 艾均文.西南大学 2008
[7]棉铃虫细胞色素P450的诱导、纯化及其性质研究[D]. 郑明奇.中国农业大学 2003
本文编号：3326963
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3326963.html
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