泡状棘球蚴骨桥蛋白基因克隆及其生物学分析

发布时间：2021-08-20 04:36

　　目的骨桥蛋白（OPN）在肿瘤的迁徙和转移中发挥重要作用,但目前泡状棘球蚴在宿主体内迁徙和转移机制尚不明确。文中旨在扩增多房棘球绦虫OPN全长基因序列并进行其生物学分析。方法提取泡球蚴原头节总RNA,逆转录成cDNA,从基因数据库中通过BLAST找到可能的OPN基因保守序列片段设计引物,PCR扩增目的基因测序并鉴定其为同源性片段,然后应用RACE方法对该目的基因进行扩增。对得到的泡球蚴OPN全长基因序列进行功能和结构分析。结果泡球蚴OPN cDNA全长1390 bp。相对分子质量为50 363.75,理论等电点（pl）为11.18,其中含有411个腺嘌呤、297个胞嘧啶、334个鸟嘌呤、348个胸腺嘧啶。ORF长度为849 bp,编码641个氨基酸,始于96 bp,止于944 bp。二级结构预测α-螺旋（h）占20.81%,β-折叠（e）占15.26%,β-转角（t）占10.08%,无规则卷曲（c）占53.85%。结论成功克隆了泡球蚴OPN基因并研究分析其序列及蛋白,为其功能研究奠定了基础。 

【文章来源】：医学研究生学报. 2020,33(10)北大核心

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

泡球蚴总RNA提取

以cDNA为模板PCR扩增泡球蚴OPN基因同源片段,获得目的基因片段,见图2。测序序列上传至NCBI BLAST与EMmg-13d08.q1k比对同源性为97%。2.3 泡球蚴OPN基因3′RACE、5′RACE扩增结果

3′RACE巢氏PCR扩增后将产物切胶回收测序得到一长度为113 bp带有PolyA尾的碱基序列。5′RACE 巢氏PCR扩增后将产物回收与pMDl8-T 载体连接,进行菌落PCR后正反双向测序分别得到长度为582 bp、578 bp的序列,经工具拼接长度为955 bp大小碱基序列。见图3。2.4 获得泡球蚴OPN全长序列及生物学分析

【参考文献】：
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硕士论文
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本文编号：3352826