沉默NF-κB/p65对TNF-α诱导的肺泡Ⅱ型上皮NOX1基因表达的影响

发布时间：2021-08-20 22:21

　　目的构建急性肺损伤肺泡Ⅱ型上皮A549细胞炎症模型,通过沉默NF-κB基因,观察NOX1基因表达水平及氧化应激指标变化,探讨NOX1基因与NF-κB/p65的相关性。方法运用RNA干扰技术沉默NF-κB/p65基因,以TNF-α（10 ng/ml）刺激肺泡Ⅱ型上皮细胞（A549）,采用RT-PCR及Western blot检测NOX1基因表达水平,DCFH-DA探针法检测细胞内活性氧水平,比色法检测细胞的总抗氧化能力、总谷胱甘肽、总超氧化物歧化酶活力和丙二醛的浓度。结果采用TNF-α刺激肺泡Ⅱ型上皮A549细胞可以分别在基因和蛋白水平上调NOX1基因表达;同时,增加细胞丙二醛和活性氧浓度,降低总抗氧化能力、总谷胱甘肽及超氧化物歧化酶浓度,氧化应激程度放大（P<0.05）。预转染NF-κB/p65 siRNA,可下调NOX1基因的表达,减少细胞丙二醛、活性氧生成,提高总抗氧化能力、总谷胱甘肽及超氧化物歧化酶浓度,氧化应激程度降低（P<0.05）。结论沉默NF-κB/p65基因,可有效下调TNF-α诱导A549细胞氧化应激程度及NOX1基因表达水平,提示NF-κB/p65可能参... 

【文章来源】：免疫学杂志. 2017,33(11)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 主要材料
    1.2 细胞培养及实验分组
    1.3 DCFH-DA探针法检测细胞内活性氧水平
    1.4 硫代巴比妥酸比色法检测细胞的丙二醛浓度
    1.5 ABTS比色法检测细胞总抗氧化能力
    1.6 氮蓝四唑 (NBT) 比色法检测细胞内总超氧化物歧化酶 (SOD) 活力
    1.7 DTNB比色法检测细胞内总谷胱甘肽的质量浓度
    1.8 Real-time RT-PCR检测NOX1基因表达水平
    1.9 Western blot法检测NOX1蛋白表达水平
    1.1 0 统计学分析
2 结果
    2.1 细胞氧化指标——活性氧、丙二醛的浓度
    2.2 细胞抗氧化指标
    2.3 NOX1 m RNA的表达水平
    2.4 NOX1蛋白的表达水平
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]NF-κB结合元件缺失对NOX1启动子转录活性的影响[J]. 吴炜景,李理,徐采云,黄文杰.  中国病理生理杂志. 2014(10)
[2]沉默NF-κB p65基因下调TNF-α诱导的肺泡上皮细胞的炎症反应[J]. 吴炜景,李跃飞,李理,李伟峰,黄文杰.  免疫学杂志. 2012(01)



本文编号：3354335