地黄毛蕊花糖苷合酶基因的克

发布时间：2021-08-31 03:36

　　目的克隆地黄Rehmanniaglutinosa毛蕊花糖苷合酶基因（Rg Ac S1）,分析其亚细胞定位和表达模式。方法在地黄的转录组数据库中通过注释和比对,获得地黄Rg Ac S1的c DNA序列,利用聚合酶链式反应（PCR）方法进行分子克隆。构建绿色荧光蛋白（GFP）融合表达载体,以农杆菌瞬时表达法观测Rg Ac S1的亚细胞定位。利用实时荧光定量PCR（q RT-PCR）检测Rg Ac S1基因在地黄块根不同部位的表达模式。结果获得地黄1个莽草酸-O-羟基肉桂酰基转移酶的全长编码序列,c DNA长度为1 659 bp,包含1个1 296 bp的开放阅读框,编码431个氨基酸残基,蛋白质相对分子质量为475 900,具有莽草酸-O-羟基肉桂酰基转移酶的典型结构域,命名为Rg Ac S1。亚细胞定位结果显示Rg Ac S1主要分布在细胞质中,在细胞核中也有分布。q RT-PCR分析表明,Rg Ac S1在地黄的周皮和根毛中表达量较高,在木质部和韧皮部表达量较低。Rg Ac S1基因在地黄品种北京1号、QH1和85-5中非菊花心中表达量均高于菊花心中的表达量,且差异达极显著水平。结论获... 

【文章来源】：中草药. 2020,51(18)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

地黄RgAcS1基因的PCR扩增产物检测

地黄不同品种的菊花心部位与非菊花心部位含量也有明显差异，分析了Rg Ac S1在地黄品种北京1号、QH1和85-5菊花心和非菊花心部位的表达量，结果（图5）表明，在3个品种非菊花心部位Rg Ac S1的表达量均明显高于菊花心部位，北京1号和QH1菊花心和非菊花心部位Rg Ac S1的表达量均显著高于85-5。图5 地黄RgAcS1的表达模式

为了分析地黄RgAcS1序列与其它已经报道的同源蛋白的序列相似性，从NCBI下载了芝麻SiHCT、拟南芥Arabidopsis thaliana(L.)Heynh.AtHCT、丹参Salvia miltiorrhiza Bunge SmHCT和大豆Glycine max(L.)Merr.GmHCT的氨基酸序列，进行多序列联配，结果（图2-A）表明，地黄RgAcS1与这些HCT蛋白的序列相似性很高，序列一致性在77.96%～92.36%，特别是在植物HCT保守的HxxxD和DFGWG 2个motif，在不同的蛋白间高度保守。进而又下载了与RgAcS1序列相似性较高的其它22个物种的同源蛋白序列，利用MEME在线软件（http://meme-suite.org/）对这25个蛋白的氨基酸序列进行保守的基序（motif）挖掘，发现（图2-B)HxxxD基序和DFGWG基序分别包含在2个不同的长50 aa的基序内，而且序列高度一致，说明HxxxD基序和DFGWG基序在这些蛋白发挥转移酶活性时非常重要。用在线软件SWISS-MODEL(http://swissmodel.expasy.org/interactive）对RgAcS1的蛋白进行三维结构预测，建模模板为彩叶草Coleus blumei Benth.HCT[13]，发现（图2-C)RgAcS1由18个β折叠和17个α螺旋组成，2个大的domain由1个连接环（Connecting loop）连接。3.3 地黄RgAcS1氨基酸序列的系统进化分析

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3374108