CRISPR/Cas9基因转录激活技术的建立及其应用

发布时间：2021-09-07 19:55

　　建立基于CRISPR/Cas9的基因转录激活技术,实现在HEK293细胞中激活cGAS基因的转录。首先利用慢病毒载体构建稳定表达Cas9的HEK293细胞;并采用Real-time PCR和western blot方法鉴定Cas9蛋白质表达效果。再选取不同靶序列,分别构建用于激活cGAS基因转录的sgRNA载体,将构建好的序列载体与CRISPR体系工具质粒共转染至稳定表达Cas9的HEK293细胞中。采用Real-time PCR方法检测细胞中内源cGAS的转录激活效果。成功建立了基于CRISPR/Cas9的基因转录激活技术,并在c GAS基因阴性表达的细胞中激活基因的转录。 

【文章来源】：科学技术与工程. 2016,16(20)北大核心

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料
    1.1 主要试剂
    1.2 主要仪器
2 方法
    2.1 构建稳定表达Cas9的HEK293细胞
        2.1.1 病毒包装
        2.1.2 HEK293细胞的病毒感染
        2.1.3 感染细胞中蛋白质的稳定表达效果检测
    2.2 sgRNA靶序列设计
    2.3 CRISPR转录激活内源蛋白的质粒构建及阳性克隆的筛选
    2.4 鉴定CRISPR调控基因转录效应
3 结果
    3.1 Cas9的稳定表达检测
    3.2 c GAS-sgRNA(MS2)阳性克隆验证及测序
    3.3 c GAS的表达水平检测
4 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]COPS3的稳定干涉细胞系建立及其在NLRP3炎症小体激活中的作用[J]. 郭赛赛,常艳,涂海情,徐广,秦璇和,吴敏,李慧艳,李爱玲.  科学技术与工程. 2015(19)
[2]新型胞质DNA感受通路:cGAS-STING的研究进展[J]. 丁亮,泥艳红,胡勤刚,侯亚义.  生物化学与生物物理进展. 2014(09)



本文编号：3390159