CRISPR/Cas9介导靶向敲除拟南芥GGB基因突变体的鉴定

发布时间：2021-09-19 20:43

　　GGB是抗旱负调控基因。为了获得拟南芥ggb突变体材料,构建了以拟南芥U6启动子驱动GGBsgRNA的CRISPR/Cas9基因组编辑载体。将构建好的编辑载体利用农杆菌介导的浸花法转化野生型拟南芥。对转基因后代GGB基因的测序结果分析发现,在靶位点处有缺失4个碱基和增加1个T碱基的2种突变体产生。分别对野生型拟南芥和上述2种ggb突变体进行半定量RT-PCR分析结果显示,突变体材料中几乎检测不到GGB基因表达,说明获得了GGB基因敲除突变体。对野生型和ggb突变体叶片失水率、耐旱表型及单株种子量的测定结果表明,与野生型相比,拟南芥GGB基因突变后,叶片失水率显著减少,抗旱性明显增强,而单株种子量却并没有改变。研究表明,GGB是一种理想的作物分子育种的候选靶基因,获得的突变体为今后从农作物中克隆的GGB同源基因进行功能互补验证提供了有用的遗传材料。 

【文章来源】：西北植物学报. 2016,36(05)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 实验材料
    1.2 方法
        1.2.1 sgRNA表达载体构建
        1.2.2 农杆菌转化载体构建
        1.2.3 拟南芥遗传转化
        1.2.4 拟南芥ggb突变体检测
        1.2.5 AtGGB基因表达RT-PCR检测
        1.2.6 拟南芥离体叶片失水率测定
        1.2.7 抗旱表型鉴定及单株种子量测定
2 结果与分析
    2.1 AtGGB突变位点选择
    2.2 CRISPR/Cas9基因编辑载体构建
    2.3 Atggb突变体检测
    2.4 AtGGB基因表达量检测
    2.5 Atggb突变体失水率测定
    2.6 Atggb突变体耐旱性表型鉴定
    2.7 Atggb突变体单株种子量测定
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]Targeted Mutagenesis in Zea mays Using TALENs and the CRISPR/Cas System[J]. Zhen Liang,Kang Zhang,Kunling Chen,Caixia Gao.  Journal of Genetics and Genomics. 2014(02)



本文编号：3402304