玉米对拟轮枝镰孢菌抗性相关基因的克隆及功能分析

发布时间：2021-09-29 23:03

　　玉米是重要的粮食、饲料和工业原料。我国玉米的种植面积占世界玉米种植总面积的25%,玉米产量和品质对于我国农业和经济发展具有重要意义。影响玉米产量和品质的因素有很多种,其中,玉米真菌性病害是影响玉米产量和品质的重要因素之一。玉米穗粒腐病是一种世界上普遍发生、危害比较严重的真菌性病害,严重影响玉米的产量和品质,对人畜安全构成严重威胁。玉米穗粒腐病的主要病原菌是拟轮枝镰孢菌。选育抗病品种是解决拟轮枝镰孢菌危害的根本方法,而这需要对抗病遗传机制及抗病基因进行深入了解。本研究通过玉米对拟轮枝镰孢菌全基因组关联分析、转录组和QTL定位区间等数据进行分析,挑选了两个与玉米拟轮枝镰孢菌抗性相关的基因,分别是 GRA4ZM2G108133（ZmBGLU）和GRA4ZAM2G1-54628（ZmPIP2d）。通过同源克隆,克隆了两个候选基因,构建两个基因的载体进行遗传转化,对候选基因进行功能分析。研究结果如下:（1）克隆了高抗玉米自交系BT-1及感病自交系N6中ZmBGLU和ZmPIP2d基因的全长。构建ZmBGLU基因和ZmPIP2d基因的瞬时表达载体,转化洋葱,结果表明:两个基因均定位在细胞质膜上。（... 

【文章来源】：河南农业大学河南省

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

【图文】：

图２－１植物表达载体ｐＣＡＭＢＩＡ２３０１－ＧＷ－ＲＮＡｉ质粒图谱??Ｆｉｇ．２－１?Ｐｌａｓｍｉｄ?ｍａｐ?ｏｆ?ｐＣＡＭＢＩＡ２３０１－ＧＷ－ＲＮＡｉ?ｖｅｃｔｏｒ??

４结果与分析??４．１?ＲＮＡ提取与检测??Ａ?Ｂ?Ｃ?Ｄ?ＥＦＧＨ??．（＇一?Ｕ——她Ａ??图４－１玉米Ｎ６和ＢＴ－１的ＲＮＡ??Ｆｉｇ．４－１?ＲＮＡ?ｏｆＮ６ａｎｄ?ＢＴ－１??泳道Ａ－Ｄ是玉米Ｎ６的ＲＮＡ电泳图；泳道Ｅ－Ｈ为玉米ＢＴ－１的ＲＮＡ电泳图。??泳道Ｃ和泳道Ｆ，ＲＮＡ的条带比较清晰。２８Ｓ条带的亮度大约是１８Ｓ的二倍。核酸浓度测??定结果表明：泳道Ｃ的Ａ２６０／Ａ２８０比值为２．１，泳道Ｆ的Ａ２６０／Ａ２８０比值为２．０。ＲＮＡ提取质??量良好，可以用于反转录。??４．２?基因全长克隆??ＭＡＢＣＤＥＦＧＨＩ?Ｍ?ＬＭＮ?Ｏ?Ｐ?Ｑ?Ｒ?Ｓ?Ｔ??Ａ?Ｂ??图４－２?Ｎ６和ＢＴ－１的ＺｗＢＧｉＬ＇基因全长扩增??Ｆｉｇ．４－２?Ｆｕｌｌ－ｌｅｎｇｔｈ?Ｚｍ５ＧＺ＿ｉ７?ｇｅｎｅ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｎ６?ａｎｄ?ＢＴ－１??泳道Ｍ是ＤＬ２Ｋ?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ。Ａ图：Ａ－Ｉ是玉米Ｎ６中扩增基因的电泳结果。Ｂ图中：Ｌ－Ｔ是玉??米ＢＴ－Ｉ扩增Ｚｍ／ＶＰ２ｄ的电泳结果。??电泳和测序结果表明：Ａ图中，泳道Ｅ和Ｆ是Ｎ６－Ｚｗ５ＧＺＣ７基因的片段；Ｂ图中泳道Ｑ和??Ｒ是ＢＴ－］－Ｚｗ５Ｇｉｔ／基因的片段。Ｎ６－Ｚｗ５ＧＺｔ／和碱基序列相同。??４．３?ＺｗＳＧｉＵ基因序列分析??４．３＿］?Ｚｗ似＂基因同源基因物种分析??３０??

４结果与分析??４．１?ＲＮＡ提取与检测??Ａ?Ｂ?Ｃ?Ｄ?ＥＦＧＨ??．（＇一?Ｕ——她Ａ??图４－１玉米Ｎ６和ＢＴ－１的ＲＮＡ??Ｆｉｇ．４－１?ＲＮＡ?ｏｆＮ６ａｎｄ?ＢＴ－１??泳道Ａ－Ｄ是玉米Ｎ６的ＲＮＡ电泳图；泳道Ｅ－Ｈ为玉米ＢＴ－１的ＲＮＡ电泳图。??泳道Ｃ和泳道Ｆ，ＲＮＡ的条带比较清晰。２８Ｓ条带的亮度大约是１８Ｓ的二倍。核酸浓度测??定结果表明：泳道Ｃ的Ａ２６０／Ａ２８０比值为２．１，泳道Ｆ的Ａ２６０／Ａ２８０比值为２．０。ＲＮＡ提取质??量良好，可以用于反转录。??４．２?基因全长克隆??ＭＡＢＣＤＥＦＧＨＩ?Ｍ?ＬＭＮ?Ｏ?Ｐ?Ｑ?Ｒ?Ｓ?Ｔ??Ａ?Ｂ??图４－２?Ｎ６和ＢＴ－１的ＺｗＢＧｉＬ＇基因全长扩增??Ｆｉｇ．４－２?Ｆｕｌｌ－ｌｅｎｇｔｈ?Ｚｍ５ＧＺ＿ｉ７?ｇｅｎｅ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｎ６?ａｎｄ?ＢＴ－１??泳道Ｍ是ＤＬ２Ｋ?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ。Ａ图：Ａ－Ｉ是玉米Ｎ６中扩增基因的电泳结果。Ｂ图中：Ｌ－Ｔ是玉??米ＢＴ－Ｉ扩增Ｚｍ／ＶＰ２ｄ的电泳结果。??电泳和测序结果表明：Ａ图中，泳道Ｅ和Ｆ是Ｎ６－Ｚｗ５ＧＺＣ７基因的片段；Ｂ图中泳道Ｑ和??Ｒ是ＢＴ－］－Ｚｗ５Ｇｉｔ／基因的片段。Ｎ６－Ｚｗ５ＧＺｔ／和碱基序列相同。??４．３?ＺｗＳＧｉＵ基因序列分析??４．３＿］?Ｚｗ似＂基因同源基因物种分析??３０??

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
[1]拟南芥AtDOF1基因的克隆及其转基因玉米的功能验证[D]. 张雪.吉林农业大学 2016



本文编号：3414638