近江牡蛎YB-1对Hsc70的转录调控及两基因对热激、污染物的响应模式

发布时间：2021-10-02 07:02

　　70-kDa热休克蛋白是热休克蛋白家族中的重要成员之一,它包括组成型（Heat shock cognate protein 70,Hsc70）和诱导型（inducible heat shock protein 70,Hsp70）两类。它们可以发挥“分子伴侣”作用,帮助细胞抵御外界胁迫。通常情况下,组成型Hsc70主要发挥看家功能。在某些宿主体内,Hsc70同样可以被多种刺激因子诱导表达,而Hsc70的表达受到转录因子调控,但是,调控Hsc70基因表达的转录因子还不清楚,急需阐明。本研究旨在筛选鉴定参与近江牡蛎（Crassostrea hongkongensis）ChHsc70基因表达调控的转录因子,并研究ChHsc70及其转录因子基因对热激、污染物的表达模式。首先通过DNA亲和纯化技术筛选出能够与ChHsc70启动子区特异性结合的蛋白因子,用质谱技术鉴定出其中一种蛋白为Y-box基元结合蛋白（Ch YB-1）。通过cDNA克隆技术获得了ChYB-1基因的全长cDNA为1257 bp,其中编码区924 bp,5’端和3’端非编码区分别为107 bp和226 bp。分子模拟结果显示ChYB... 

【文章来源】：暨南大学广东省 211工程院校

【文章页数】：109 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

不同热休克因子发挥功能的模型图

anogastery)Yps；Y-box binding protein的分子结构 主要包括三个结构域：N-端富含丙氨酸或脯氨酸结构域（A/P 结构域）、D）及 C-端富含正电荷和负电荷氨基酸残基交替簇结构域（CTD），具体CSD 结构域的结构与细菌冷休克蛋白高度相似，该区域由五个反向平行，在第二个 β-折叠的保守序列 K/N-G-F/Y-G-F-I/V 和第三个 β-折叠中的保 为核酸结合位点，可以与 DNA/RNA 特异性结合[83]。分析 A/P 结构域及二级结构的特点，YB-1 的这两个区域的二级结构没有保守的规律，是一76]。但是 CTD 结构域有 poly（Pro）II 结构，YB-1 可通过这个特殊结构的相互作用，另外，CTD 这种特殊的无序结构及正电荷与负电荷交替排于 YB-1 与核酸分子相互结合[76]。

白的电泳检测 亲和纯化分离得到了能够与 ChHsc70 启动子区特异性结合的纯化得到的蛋白质通过 SDS-PAGE 凝胶电泳进行检测，实验结泳图从左到右依次表示用 200 mM 和 1 M 洗脱液洗脱得到的对Cl2处理实验组得到的 DNA-核总蛋白洗脱液。经不同浓度洗脱组与实验组及不同实验组之间表现出明显差异。在众多差异条小为 40 kDa 左右的蛋白条带引起我们的兴趣，如图中箭头所示3。M3 蛋白条带只出现在用 CdCl2污染物处理的实验组中，在的对应位置中并未发现该蛋白。结果表明，当近江牡蛎受不同刺蛋白质与 ChHsc70 启动子区结合。

【参考文献】：
期刊论文
[1]双荧光素酶报告基因系统的应用研究进展[J]. 耿德玉,原媛,郭华荣.  科技资讯. 2012(21)
[2]近江牡蛎HSC70基因对溶藻弧菌感染的反应[J]. 刘志刚,张其中,张占会,崔淼.  中国水产科学. 2012(03)
[3]热休克蛋白70及27的研究进展[J]. 曾涛,李国勤,卢立志,陶争荣.  中国家禽. 2012(08)
[4]香港巨牡蛎雌雄群体的数量性状通径分析[J]. 肖述,符政君,喻子牛.  南方水产科学. 2011(04)
[5]热休克蛋白70的生物学功能及应用的研究进展[J]. 杨震国.  中国饲料. 2010(23)
[6]中国近海“近江牡蛎”的分类和订名[J]. 王海艳,郭希明,刘晓,张国范,张素萍,徐凤山.  海洋科学. 2007(09)
[7]分子伴侣的功能和应用[J]. 聂忠清,吴永刚,蒙建洲.  生命科学. 2006(01)
[8]热休克蛋白研究进展[J]. 曲凌云,孙修勤,相建海,洪旭光,张进兴.  海洋科学进展. 2004(03)
[9]从动物组织提取高质量总RNA方法的改进[J]. 王桂玲,刘戈飞,黄东阳.  生物技术通讯. 2003(06)
[10]“南海贻贝观察”:广东沿海牡蛎体中Zn含量水平及其变化趋势[J]. 贾晓平,林钦,李纯厚,蔡文贵.  海洋环境科学. 2000(04)

博士论文
[1]近江牡蛎HSP70s基因及其对污染物的反应[D]. 张占会.暨南大学 2010



本文编号：3418192