PtrMYB92基因调控毛果杨木质部发育与干旱胁迫响应的研究

发布时间：2021-10-09 04:47

　　木材是工业和生物质能源等生产的被广泛使用的可再生原料。林木次生木质部不仅木质化形成木材,同时负责将根吸收的水分及离子运输到其他组织,其发育和建成对林木适应干旱环境尤为重要。因此,通过对木质部响应干旱胁迫的研究,既可以了解更多有关抗旱的机制,也可以了解干旱胁迫对生产木质生物质的影响。MYB家族转录因子不仅在木材形成中发挥着关键的转录调控作用,而且在植物响应干旱胁迫中起着重要的调控作用。本实验室前期研究结果显示PtrMYB92基因在毛果杨木质部中特异表达,并且受干旱胁迫调控,预示着PtrMYB92基因可能参与调控毛果杨木质部发育以及干旱胁迫响应过程。本研究首先通过农杆菌浸染的快速遗传转化法将PtrMYB92基因过表达载体和CRISPR突变载体对毛果杨进行遗传转化,并对转基因植株进行DNA、RNA水平分子检测及测序鉴定,最终获得了 13个过表达PtrMYB92转基因株系和4个敲除PtrMYB92基因的突变体株系。通过观察这些转基因和突变体植株的表型发现,与野生型毛果杨相比,过表达PtrMYB92转基因植株的根系少、茎干细、叶片小、植株矮,而PtrMYB92基因突变体植株在形态上与野生型没有明... 

【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－１技术路线??注：虚线部分为实验室前期实验结果??

－ＲＴ－Ｆ?（５?＾Ｍ）?０．６?ｐｉ??Ａｃｔｉｎ－Ｒ／Ｔ－ＰｆｒＭＹＢ９２－ＲＴ－Ｒ?Ｃ５?＾Ｍ）?０．６?ｐｉ??反应条件：??９５°Ｃ预变性ｌＯｍｉｎ；?９５°Ｃ变性３０?ｓ；?５５°Ｃ退火３０ｓ；?６８°Ｃ延伸ｌｍｉｎ；共扩增４０个循??环，６８°Ｃ再延伸３０ｍｉｎ；?４°Ｃ保存。??２．３结果与分析??２．３．１?的表达特异性和生物信息学分析??通过本实验室前期的实验研究收集毛果杨的不同组织水平部位：顶芽、叶片、木质??部和韧皮部，进行ＲＮＡ－ｓｅｑ，数据分析如图２－１显示ＰｏＭ．如７容／从汾Ｗ?基??因的表达情况是其在木质部的相对表达量为４０多，而在顶芽、叶片、韧皮部的表达水??平极其低不超过１，因而是木质部特异表达基因。??５０????ｆ—１?Ｐｔｒ＼（ＹＢ９２??４０?－?ｒ＾＾＞ｉ??＊３０．??蛘２０．??友??班?１〇，?＿??會．??〇Ｊ?＊■■■■?Ｉ—??．?＇?ｉ?????ｘｙｌｅｍ?ｐｈｌｏｅｍ?ｌｅａｆ?ｓｈｏｏｔ??图２－１尸基因特异性表达分析??之后使用ＮＣＢＩ数据库当中的ＯＲＦ?Ｆｉｎｄｅｒ程序，对ＰｏｆｒＷＷｇＡ？挞則２）??基因的开放读码框进行绘制，并用ＢｉｏＥｄｉｔ软件将基因翻译成下面的蛋白序列：??－１２－??

东北林业大学硕士学位论文??纖匪??图２－２过表达毛果杨的获得??２．３．２．２?Ｐ／ｒＭＹ５９２过表达转基因毛果杨的ＤＮＡ水平检测??当有抗性的小苗生长到约５?ｃｍ时，剪取其第２片叶子提取ＤＮＡ，并且使用ｐＢＩ１２１??载体上的３５Ｓ启动子区域的片段当做检测ＤＮＡ的上游引物，取基因的中间一段２０ｂｐ长??度的特异性序列为下游引物，总长度约５００ｂｐ，对提取的毛果杨叶片ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩??增检测。在检测时分别使用同种引物对过表达重组质粒、提取的野生型ＤＮＡ??以及水进行ＰＣＲ扩增，过表达重组质粒的扩增产物作阳性对照，野生型??ＤＮＡ、水的ＰＣＲ扩增产物作阴性对照。对获得的ＰＣＲ产物进行１％琼脂凝胶电泳实??验。电泳结果如图２－３所示。说明过表达重组质粒成功整合到了毛果杨基因??组当中。?Ｍ?１?２?３?４?５?６??２〇〇〇ｂｐ?—??ｉ〇〇〇ｂｐ??５〇〇ｂＰ?■■■??图２－３转基因毛果杨ＤＮＡ水平检测??注：图中Ｍ：?ＤＮＡＭａｒｋｅｒＤＬｌＯＯＯ；?１：?３５Ｓ：／ＶＭｒａ９２质粒作阳性对照；２－４：待测植株的??ＤＮＡ；?５：野生型毛果杨的ＤＮＡ；?６：水??２．３．２．３竹ｒＭｒ５５＞２过表达转基因毛果杨的ＲＮＡ水平检测??对ＤＮＡ检测有条带的抗性植株，再剪取其第３片叶子进行ＲＮＡ的提取，然后将??其反转录合成ｃＤＮＡ，并以ｃＤＮＡ作为模板，毛果杨ＰｔｒＡｃｔｉｎ７基因??（Ｐｏｔｒｉ．０１９Ｇ０１０４００）作对照，进行实时荧光定量ＰＣＲ检测基因的表达量，对定量结果??进行数据分析［７４］。在转基因株系中基因的表达水平，检测结果如图２－４所示，共有１３??个株系在ＲＮＡ水平检测到不同程度

【参考文献】：
期刊论文
[1]MYB转录因子在植物抗逆胁迫中的作用及其分子机理[J]. 刘蕾,杜海,唐晓凤,吴燕民,黄玉碧,唐益雄.  遗传. 2008(10)



本文编号：3425662