利用CRISPR/Cas9技术构建GLRX3基因敲除的HEK293细胞系

发布时间：2021-10-20 06:18

　　为了构建GLRX3（Glutaredoxin 3）敲除的HEK293细胞系,根据该蛋白结构特性设计了靶向于GLRX3基因Exon5的4个sgRNA,并通过T7E1检测确认了所设计sgRNA的有效性。将携带Cas9及靶向hGLRX3-Exon5的sgRNA1的打靶载体转染HEK293,通过药物Puromycin和细胞克隆化筛选出稳定GLRX3基因敲除的HEK293细胞株,并通过测序确定GLRX3两个等位基因均发生移码突变。通过免疫印迹在蛋白表达水平确认了该基因的敲除。利用CRISPR/Cas9技术成功构建了GLRX3敲除的HEK293细胞株,其为探索GLRX3的功能和作用机制提供了有效的细胞模型。 

【文章来源】：陕西师范大学学报(自然科学版). 2017,45(01)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 细胞株和载体
        1.1.2 实验试剂
        1.1.3 引物合成和测序
    1.2 实验方法
        1.2.1 sgRNA表达载体的构建
        1.2.2 sgRNA打靶效率的检测
        1.2.3 用于GLRX3基因敲除的打靶载体的构建
        1.2.4 构建GLRX3敲除的HEK293细胞系
        1.2.5 免疫印迹检测
2 结果
    2.1 用于human GLRX3基因敲除的打靶载体的构建
    2.2 hGLRX3基因敲除HEK293细胞的建立
3 讨论
4 结论



本文编号：3446404