长期染烟BEAS-2B细胞的组蛋白乙酰化修饰及FOXO3基因调控细胞增殖与凋亡机制研究

发布时间：2021-10-21 02:09

　　目的:以香烟烟雾对人支气管上皮细胞（BEAS-2B）进行长期染毒,检测其整体组蛋白乙酰化状态改变,在染烟细胞组蛋白H3K9乙酰化状态差异改变的基因中筛选并验证其中的FOXO3基因,进一步分析FOXO3基因在香烟烟雾引起的细胞增殖及凋亡改变中的作用机制。目的是深入探讨吸烟致肺癌的发病机制,为肺癌的临床诊断、治疗及预后提供新的理论基础。方法:利用实验室前期建立的长期香烟烟雾暴露细胞模型,用Western Blot检测各染毒组细胞组蛋白去乙酰化酶1（HDAC1）及组蛋白H3K9乙酰化蛋白（A-H3K9）的表达;生物信息学分析染烟后组蛋白异常乙酰化基因;荧光实时定量PCR和Western Blot检验染烟及组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA对FOXO3表达的影响;CCK8方法检测细胞增殖率;流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡;检测caspase3/7活性及Bax/Bcl-2比率分析细胞凋亡通路活化状态;细胞慢病毒转染进行FOXO3过表达,CCK8及caspase3/7活性方法检测转染FOXO3慢病毒后细胞的增殖及凋亡状态;Western Blot检测染烟及JNK通路抑制剂（JNKi）处理对FOXO3及... 

【文章来源】：苏州大学江苏省 211工程院校

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

对照组及各染烟组细胞中HDAC1及A-H3K9蛋白表达（注：*：P<0.05；）

图 2 对照组及各染烟组细胞 TSA 作用前后 FOXO3 基因表达情况（A. 对照组及各染烟组细胞TSA作用前后FOXO3基因mRNA表达量； B. 对照组及各染烟组细胞FOXO3蛋白表达及灰度分析；C. TSA处理后对照组及染烟组细胞FOXO3蛋白表达及灰度分析；注：与2B+TSA(-)组比较，*：P <0.05；**：P <0.01；***：P <0.001；与TSA(-)

16图 3 组蛋白乙酰化芯片中参与 PI3K/AKT 通路的基因通过生物信息学分析高通量Chip-seq检测到组蛋白异常乙酰化的基因，发现这些基因主要富集到四条通路上，其中PTEN dependent cell cycle arrest and apoptosis


本文编号：3448035