靶向TLR2基因的siRNA对牛疱疹病毒Ⅰ型增殖规律的影响

发布时间：2021-10-22 08:47

　　为研究牛胚胎气管（EBTr）细胞Toll样受体2（TLR2）在牛疱疹病毒Ⅰ型（BHV-1）感染的天然免疫反应中的作用,本研究利用小分子干扰RNA（si RNA）技术,以TLR2为靶向设计并合成了3条si RNA干扰序列,用SYBR GreenⅠ定量PCR方法筛选出最佳的si RNA-TLR2干扰片段,继而转染EBTr细胞使其TLR2沉默后感染BHV-1,用Taq Man定量PCR方法检测BHV-1不同时间点的增殖变化。结果显示,与对照组相比转染后第48小时si TLR2A、si TLR2B和si TLR2C在EBTr细胞中分别对TLR2 m RNA表达量下调了35.05%、69.20%和84.85%,筛选出的si TLR2C片段在第12⁷2小时可以显著抑制TLR2 m RNA的表达（P<0.05）,用该片段转染EBTr细胞再感染BHV-1后第6⁷2小时,si RNA-TLR2组BHV-1 DNA拷贝数显著低于对照组BHV-1 DNA拷贝数（P<0.05）。本试验成功筛选出了特异性抑制EBTr细胞TLR2基因的si RNA片段,并证... 

【文章来源】：中国兽医科学. 2016,46(12)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

TLR2荧光定量PCR的标准曲线

第周伟光等：靶向TLR2基因的siRNA对牛疱疹病毒Ⅰ型增殖规律的影响12期图1脂质体转染siRNA-TLR2后的EBTr细胞200×Fig.1MicrographsofsiRNA-TLR2transfectedEBTrcellsA：转染EBTr细胞24h的白光显微镜照片；B：转染EBTr细胞24h的荧光显微镜照片A：EBTrcellswereobservedunderwhitelightaftertransfecting24h；B：EBTrcellswereobservedunderfluorescence（B）microscopeaftertransfecting24h图2TLR2荧光定量PCR的标准曲线Fig.2Thestandardcurveofreal-timePCRforTLR2图3β-actin荧光定量PCR的标准曲线Fig.3Thestandardcurveofreal-timePCRforβ-actin35.032.530.027.525.022.520.017.515.012.510.07.5102030100200100010000100000100000010000000100000000100000000010000000000循环数CyclenumberTLR2拷贝数/LTLR2copies/L35.032.530.027.525.022.520.017.515.012.510.07.55.012345102030100200100010000100000100000010000000100000000100000000010000000000循环数cyclenumberβ-actin拷贝数/Lβ-actincopies/LAB1527

第周伟光等：靶向TLR2基因的siRNA对牛疱疹病毒Ⅰ型增殖规律的影响12期图1脂质体转染siRNA-TLR2后的EBTr细胞200×Fig.1MicrographsofsiRNA-TLR2transfectedEBTrcellsA：转染EBTr细胞24h的白光显微镜照片；B：转染EBTr细胞24h的荧光显微镜照片A：EBTrcellswereobservedunderwhitelightaftertransfecting24h；B：EBTrcellswereobservedunderfluorescence（B）microscopeaftertransfecting24h图2TLR2荧光定量PCR的标准曲线Fig.2Thestandardcurveofreal-timePCRforTLR2图3β-actin荧光定量PCR的标准曲线Fig.3Thestandardcurveofreal-timePCRforβ-actin35.032.530.027.525.022.520.017.515.012.510.07.5102030100200100010000100000100000010000000100000000100000000010000000000循环数CyclenumberTLR2拷贝数/LTLR2copies/L35.032.530.027.525.022.520.017.515.012.510.07.55.012345102030100200100010000100000100000010000000100000000100000000010000000000循环数cyclenumberβ-actin拷贝数/Lβ-actincopies/LAB1527

【参考文献】：
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本文编号：3450759