玫瑰RrSLF基因的克
发布时间：2021-10-25 00:12
玫瑰（Rosa rugosa）是我国传统名花。研究发现,玫瑰自交不亲和机制与杏（Armeniaca vulgaris Lam.）、梨（Pyrus spp）等蔷薇科植物的自交不亲和机制相同,都属于S-RNase参与的配子体自交不亲和。植物S基因（包括花柱S-RNase基因和花粉SLF基因）控制了自交不亲和现象,对花粉SLF基因的研究是探索配子体自交不亲和（GSI）机制的关键之一。本文运用RT-PCR结合RACE技术从玫瑰花粉中克隆得到一条玫瑰自交不亲和基因RrSLF,分析了该基因的序列特征和生物信息学特性,并对其进行了亚细胞定位研究和荧光定量表达分析,为进一步深入研究玫瑰自交不亲和机理奠定了基础。主要研究结果如下:1.玫瑰RrSLF基因序列全长1236 bp,开放阅读框1122bp,共编码373个氨基酸。玫瑰RrSLF基因编码蛋白:相对分子量为43706.15Da;理论等电点值PI=6.24;在343-741位含有F-box保守结构域;没有信号肽切割位点,为非分泌蛋白;平均疏水性指数为0.716,为疏水性蛋白;无跨膜区存在;有21个Ser磷酸化位点,7个Thr酸磷化位点,7个Tyr氨酸磷...
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
pROKII-GFP结构
图 3-1 玫瑰花柱总 RNA 电泳图M:DL2000maker;1,2:RNA 条带Fig. 3-1 Total RNA isolated from Rosa rugosa styleM: DL2000maker;1,2:RNA bands间片段、3′-RACE 和 5′-RACE 克隆并引物 F1、R1，扩增得到大约 401接至 pMD18-T 载体，转化大肠杆菌CR 验证合格后送北京华大公司测序，列与杏、野草莓和扁桃的 SLF 基因计引物分别进行 3′-RACE 和 5′-RRACE 序列片段，3′-RACE 序列长度RACE 和 5′-RACE PCR 产物分别切态细胞，挑取阳性克隆，培养过夜，测序序列分别在 NCBI 网站上比对，结
M:DL2000maker;1,2:RNA 条带Fig. 3-1 Total RNA isolated from Rosa rugosa styleM: DL2000maker;1,2:RNA bands.2 玫瑰 RrSLF 基因中间片段、3′-RACE 和 5′-RACE 克隆根据保守序列设计简并引物 F1、R1，扩增得到大约 401bp 大小的中间片段。PCR 产物切胶回收后链接至 pMD18-T 载体，转化大肠杆菌感受态细胞，挑取阳培养过夜，经菌液 PCR 验证合格后送北京华大公司测序，将测序序列在 NCBI 对，结果显示所得序列与杏、野草莓和扁桃的 SLF 基因序列一致性达 66%-73中间片段序列及所设计引物分别进行 3′-RACE 和 5′-RACE 扩增，获得该基 3′-RACE 和 5′-RACE 序列片段，3′-RACE 序列长度为 751bp，5′-RAC度为 267bp，将 3′-RACE 和 5′-RACE PCR 产物分别切胶回收后连接至 pMD，转化大肠杆菌感受态细胞，挑取阳性克隆，培养过夜，经菌液 PCR 验证合京华大公司测序，将测序序列分别在 NCBI 网站上比对，结果显示 3′-RACE 和CE 序列与扁桃、杏和日本樱的 SLF 基因序列一致性达 61%-71%（图 3-2）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]果树自交不亲和SFB与S-RNase作用分子机制研究进展[J]. 杨芩,付燕. 中国果树. 2015(02)
[2]玫瑰与月季种间杂交障碍原因分析[J]. 于晓艳,邢树堂,赵兰勇. 中国农业科学. 2014(15)
[3]蔷薇科果树自交不亲和性分子机制研究进展[J]. 张绍铃,吴巨友,吴俊,齐永杰,高永彬. 南京农业大学学报. 2012(05)
[4]葡萄赤霉素合成相关基因克隆、亚细胞定位和表达分析[J]. 王西成,任国慧,房经贵,李阿英,刘洪,吴伟民,赵密珍. 中国农业科学. 2012(11)
[5]盐穗木HcGKR基因亚细胞定位表达载体的构建及定位分析[J]. 郝晓燕,张毓露,足木热木,危晓薇,邵琳,陈果,黄全生. 新疆农业科学. 2012(02)
[6]Identification of a Ubiquitin-Binding Structure in the S-Locus F-Box Protein Controlling S-RNase-Based Self-Incompatibility[J]. Guang Chen~(a,b,c,1),Bin Zhang~(a,b,c,1),Lijing Liu~(b,c),Qun Li~a,Yu’e Zhang~a, Qi Xie~b,Yongbiao Xue~(a,*) a State Key Laboratory of Molecular Developmental Biology,Institute of Genetics and Developmental Biology, Chinese Academy of Sciences and National Center for Plant Gene Research,Beijing 100101,China b State Key Laboratory of Plant Genomics,Institute of Genetics and Developmental Biology, Chinese Academy of Sciences and National Center for Plant Gene Research,Beijing 100101,China cGraduate University of Chinese Academy of Sciences,Beijing 100190,China. 遗传学报. 2012(02)
[7]盐胁迫对玫瑰生长和生理特性的影响[J]. 杨志莹,赵兰勇,徐宗大. 应用生态学报. 2011(08)
[8]玫瑰果实生长动态研究[J]. 刘平,赵兰勇,孙曰波,刘张璐. 山东农业科学. 2010(01)
[9]中国野生玫瑰种质资源调查及其形态变异研究[J]. 冯立国,邵大伟,生利霞,赵兰勇,于晓艳. 山东农业大学学报(自然科学版). 2009(04)
[10]玫瑰花航天育种技术研究[J]. 孟宪水,吕传润,董桂芝,丁刚,张静菊. 山东林业科技. 2009(05)
博士论文
[1]梨自交亲和性变异的分子机理研究[D]. 吴华清.南京农业大学 2006
本文编号：3456275
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
pROKII-GFP结构
图 3-1 玫瑰花柱总 RNA 电泳图M:DL2000maker;1,2:RNA 条带Fig. 3-1 Total RNA isolated from Rosa rugosa styleM: DL2000maker;1,2:RNA bands间片段、3′-RACE 和 5′-RACE 克隆并引物 F1、R1，扩增得到大约 401接至 pMD18-T 载体，转化大肠杆菌CR 验证合格后送北京华大公司测序，列与杏、野草莓和扁桃的 SLF 基因计引物分别进行 3′-RACE 和 5′-RRACE 序列片段，3′-RACE 序列长度RACE 和 5′-RACE PCR 产物分别切态细胞，挑取阳性克隆，培养过夜，测序序列分别在 NCBI 网站上比对，结
M:DL2000maker;1,2:RNA 条带Fig. 3-1 Total RNA isolated from Rosa rugosa styleM: DL2000maker;1,2:RNA bands.2 玫瑰 RrSLF 基因中间片段、3′-RACE 和 5′-RACE 克隆根据保守序列设计简并引物 F1、R1，扩增得到大约 401bp 大小的中间片段。PCR 产物切胶回收后链接至 pMD18-T 载体，转化大肠杆菌感受态细胞，挑取阳培养过夜，经菌液 PCR 验证合格后送北京华大公司测序，将测序序列在 NCBI 对，结果显示所得序列与杏、野草莓和扁桃的 SLF 基因序列一致性达 66%-73中间片段序列及所设计引物分别进行 3′-RACE 和 5′-RACE 扩增，获得该基 3′-RACE 和 5′-RACE 序列片段，3′-RACE 序列长度为 751bp，5′-RAC度为 267bp，将 3′-RACE 和 5′-RACE PCR 产物分别切胶回收后连接至 pMD，转化大肠杆菌感受态细胞，挑取阳性克隆，培养过夜，经菌液 PCR 验证合京华大公司测序，将测序序列分别在 NCBI 网站上比对，结果显示 3′-RACE 和CE 序列与扁桃、杏和日本樱的 SLF 基因序列一致性达 61%-71%（图 3-2）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]果树自交不亲和SFB与S-RNase作用分子机制研究进展[J]. 杨芩,付燕. 中国果树. 2015(02)
[2]玫瑰与月季种间杂交障碍原因分析[J]. 于晓艳,邢树堂,赵兰勇. 中国农业科学. 2014(15)
[3]蔷薇科果树自交不亲和性分子机制研究进展[J]. 张绍铃,吴巨友,吴俊,齐永杰,高永彬. 南京农业大学学报. 2012(05)
[4]葡萄赤霉素合成相关基因克隆、亚细胞定位和表达分析[J]. 王西成,任国慧,房经贵,李阿英,刘洪,吴伟民,赵密珍. 中国农业科学. 2012(11)
[5]盐穗木HcGKR基因亚细胞定位表达载体的构建及定位分析[J]. 郝晓燕,张毓露,足木热木,危晓薇,邵琳,陈果,黄全生. 新疆农业科学. 2012(02)
[6]Identification of a Ubiquitin-Binding Structure in the S-Locus F-Box Protein Controlling S-RNase-Based Self-Incompatibility[J]. Guang Chen~(a,b,c,1),Bin Zhang~(a,b,c,1),Lijing Liu~(b,c),Qun Li~a,Yu’e Zhang~a, Qi Xie~b,Yongbiao Xue~(a,*) a State Key Laboratory of Molecular Developmental Biology,Institute of Genetics and Developmental Biology, Chinese Academy of Sciences and National Center for Plant Gene Research,Beijing 100101,China b State Key Laboratory of Plant Genomics,Institute of Genetics and Developmental Biology, Chinese Academy of Sciences and National Center for Plant Gene Research,Beijing 100101,China cGraduate University of Chinese Academy of Sciences,Beijing 100190,China. 遗传学报. 2012(02)
[7]盐胁迫对玫瑰生长和生理特性的影响[J]. 杨志莹,赵兰勇,徐宗大. 应用生态学报. 2011(08)
[8]玫瑰果实生长动态研究[J]. 刘平,赵兰勇,孙曰波,刘张璐. 山东农业科学. 2010(01)
[9]中国野生玫瑰种质资源调查及其形态变异研究[J]. 冯立国,邵大伟,生利霞,赵兰勇,于晓艳. 山东农业大学学报(自然科学版). 2009(04)
[10]玫瑰花航天育种技术研究[J]. 孟宪水,吕传润,董桂芝,丁刚,张静菊. 山东林业科技. 2009(05)
博士论文
[1]梨自交亲和性变异的分子机理研究[D]. 吴华清.南京农业大学 2006
本文编号：3456275
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3456275.html
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