女性患者解脲脲原体抗四环素耐药基因回复突变的研究

发布时间：2021-10-28 13:26

　　目的了解女性解脲脲原体的感染率,分析其中解脲脲原体对四环素耐药性的回复突变的情况及可能原因。方法对解脲脲原体临床株分离并进行药敏实验,统计感染率。使用试剂盒提取四环素敏感株的基因组DNA,并通过PCR和琼脂糖凝胶电泳检测tetM耐药基因片段,了解其中解脲脲原体临床株回复突变的现象;对携tetM耐药基因的四环素回复突变株tet（M）基因克隆并测序,使用Blast与Genbank标准序列（U08812.1）进行对比分析,探索回复突变的主要位点。结果解脲脲原体检出率为24.81%,其中对四环素的耐药率为9.23%,四环素敏感株中tetM耐药基因的携带率为42.37%（n=25）,tetM基因全长及前导肽序列测序的三个样品与标准序列对比后,确认其在前导序列均存在不同程度的位点突变。结论解脲脲原体的四环素敏感株携带有tetM的耐药基因,该基因前导序列的突变可能是其四环素耐药回复突变的原因之一,探索耐药基因对临床抗生素使用具有一定指导意义。 

【文章来源】：热带医学杂志. 2020,20(09)

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

PCR检测四环素501 bp tet M耐药基因

选取由图1检测到的携501 bp耐药基因tet M，扩增tet(M）基因全长及其前导序列并留待测序，以判断tet M是否发生突变而未表达。用TET-1和TET-2扩增tet M基因片段tet M-A，长度约为1.3 kb；用TET-3和TET-4扩增tet M基因片段tet M-B，长度约为1.6 kb，其中UU 8和UU 28得到了所设计的两段PCR片段，UU 6仅得到tet M-A片段，其它样本的该两个片段均未扩增出来，见图2。2.5 Uu四环素回复突变株中tet(M）全长基因序列的比对

59株对四环素敏感的解脲脲原体中，对四环素耐药基因携带率高达42.37%，可见该院内解脲脲原体临床样本对四环素的回复突变现象广泛存在。Chopra等[11-12]在8种不同来源tet M基因的比较中发现，尽管下游序列差异很大，但是其上游序列的同源性高达90%～100%，可见tet M基因上游序列的编码翻译可能对tet M的表达极为重要。因此，本研究尝试对临床株回复突变的情况进一步探索，用tet M耐药基因501 bp序列PCR检测其耐药基因携带率，随后进行tet(M）全基因及前导肽序列的扩增，然而仅扩增出UU8和UU28全长及UU6 1.3 kb的tet M-A短片段，这可能与tet(M）基因缺失与突变有极大关系。克隆测序并与Genbank标准序列比对，在U08812.1基因的1981位上存在tet M的启动子，通过研究克隆的序列比对后发现，碱基突变和碱基缺失主要集中于tet M启动子的上游序列区域。这可能是tet M起始密码子上游的共同突变，引起tet M前导序列转录翻译的错误，使得前导序列提前终止转录，或者使得tet M前导肽发生错误翻译转录作用。故此，tet M耐药基因中的多个点突变，可能是tet M耐药基因未表达或表达量低的关键原因，这使得存在耐药基因的临床株重新出现了对该药物的敏感性。图4 UU28的tet(M）基因序列与已出版标准序列（U08812.1）比对

【参考文献】：
期刊论文
[1]解脲脲原体生物群分布与耐药性差异研究[J]. 张艳,华川,李苏利,宋娟,王芊,李扬.  中国人兽共患病学报. 2016(01)
[2]长沙地区泌尿生殖道支原体感染及其耐药性分析(英文)[J]. 廖朝晖,鲁建云,陈静,左成忻,严开林,黄进华.  中国现代医学杂志. 2004(08)



本文编号：3462875