镉胁迫下能源甜菜BvGST基因在酵母中的功能分析

发布时间：2021-10-31 23:15

　　植物谷胱甘肽转移酶（GSTs）在正常生长条件下的细胞代谢以及由于重金属胁迫所带来的解毒过程中,都发挥着重要作用。为了进一步研究BvGST基因在能源甜菜镉逆境胁迫中的功能,本研究利用RT-PCR的方法,从能源甜菜体内克隆获得了Beta vulgaris glutathione S-transferase（BvGST,LOC104898671）基因。利用酵母表达载体构建pYES2-BvGST重组质粒,并转化到酵母InVSc1中。SqRT-PCR结果表明,与内参基因ACT1相比,BvGST基因可以受到半乳糖的诱导从而适量表达。当施加0.5 mmol/L CdCl2逆境胁迫后,适量表达BvGST重组菌的生长状态和趋势要明显优于对照菌株（转化pYES2的酵母）,并具有相对更高的Cd耐受性。因此可以推断,能源甜菜BvGST基因在镉逆境胁迫过程中发挥着重要的作用,并有可能通过GST介导的氧化逆境的活性解毒,从而参与到细胞对重金属镉离子的代谢平衡调控过程中。 

【文章来源】：中国糖料. 2020,42(04)

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

能源甜菜BvGST基因的克隆

提取酵母pYES2质粒，利用限制性内切酶BamHI和Xho I将pYES2质粒和pEASY-T1-BvGST质粒进行酶切，得到带有特异性连接的粘性末端的载体和目的片段（图2-A）。胶回收目的条带，通过T4连接酶过夜连接以及大肠杆菌转化，所获得的的Amp抗性克隆的质粒DNA经过BamHI以及Xho I的双酶切鉴定，分别在5.9 kb和642 bp左右的位置获得了相应的目的条带，从而获得正确的酵母重组质粒pYES2-BvGST（图2-B）。将阳性克隆转入酵母InVSc1中以进行下一步的检测及功能分析。2.3 BvGST基因在酵母体内的表达

为了进一步检测重组质粒pYES2-BvGST在酵母InVSc1中的表达情况，实验将重组菌培养于诱导型培养基YPGDR中，适量诱导表达目的基因BvGST，以酵母ACT1基因作为内参基因。Semi-quantitative PCR研究表明，经过半乳糖的诱导，随着培养时间的增加，与酵母ACT1基因的表达几乎没有变化相比，BvGST基因的表达量却在逐渐增加（图3），从而实验进一步证实了甜菜BvGST基因在重组酵母菌体内可以被诱导并正确地表达。2.4 镉胁迫下甜菜BvGST基因在酵母体内的功能分析

【参考文献】：
期刊论文
[1]镉逆境胁迫下甜菜BvHIPP24基因在大肠杆菌的功能分析[J]. 鲁振强,王锦霞,董大鹏,张司扬,刘大丽.  中国糖料. 2019(04)
[2]甜菜BvMTP11基因的克隆及序列分析[J]. 王锦霞,李硕,代春艳,马龙彪,刘大丽.  中国糖料. 2019(03)



本文编号：3469046