川硬皮肿腿蜂对松墨天牛相关信息物质的学习记忆及与CREB基因表达的关系
发布时间：2021-11-04 00:49
面对复杂而多变的环境信息,寄生蜂通过学习行为高效利用环境中的化学信息物质从而提高其找到寄主的效率。在生物防治的背景下,利用寄生蜂的学习提高其对钻蛀性害虫寄生率的研究需求迫切。本实验基于川硬皮肿腿蜂（Scleroderma sichuanensis Xiao）的学习行为,以不同学习日龄的川硬皮肿腿蜂雌蜂为研究对象,通过行为学分析明确了不同学习日龄川硬皮肿腿蜂对松墨天牛（Monochamus alternatus Hope）虫粪和受害松树挥发物的学习记忆差异。进行转录组测序,并以此为基础进行CREB（cAMP-response element binding protein）基因筛选,采用RT-PCR技术成功克隆出川硬皮肿腿蜂的2个CREB基因,采用荧光定量PCR技术分析CREB1、CREB2在不同学习日龄川硬皮肿腿蜂中的转录表达图谱,同时分析CREB基因在不同虫态和不同学习经历成蜂的表达情况,为探究川硬皮肿腿蜂的学习记忆机制积累研究资料、提供数据支持,取得如下结果:（1）在川硬皮肿腿蜂行为学研究中发现,对于松墨天牛虫粪和受害松树的挥发物成分,不同种挥发物对川硬皮肿腿蜂的学习刺激作用不同,...
【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Y型嗅觉仪构造图
11Qubie对RNA浓度进行精确定量；Agilent2100精确检测RNA的完整性。4.3.2文库构建与质量检验图4.2文库构建原理图Fig.4.2Libraryconstructionschematicdiagram如图4.2所示，样品质量检测合格后，用含多胸腺嘧啶的磁珠富集川硬皮肿腿蜂的基因，加入裂解缓冲液将基因分成短片段，然后以短片段核糖核酸为模板，加入六碱基随机引物和逆转录酶合成基因第一链，通过试剂盒加入三磷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸、DNA聚合酶Ⅰ、糖核酸酶H以及缓冲液合成第二链cDNA，双链cDNA通过加入AMPureXP珠纯化。为纯化后的双链cDNA加上A尾，连接测序接头，末端修复。随后，进行PCR扩增，产物使用AMPureXPbeads纯化，以获取文库。对构建成功的文库首先使用Qubit2.0定量测定，而后稀释到1.5ng/ul，使用Agilent2100进行插入尺寸检测，最后使用荧光定量PCR对文库进行定量测定，以保证浓度＞2nM供试。4.3.3测序将通过质检的文库按有效浓度和预计数据量结合后进行IlluminaHiSeq2000测
5.1.1 混合挥发物对比同一日龄的有、无学习经历的川硬皮肿腿蜂，经 X2检验结果显示：与未经历气味学习的川硬皮肿腿蜂相比，学习后的川硬皮肿腿蜂对混合挥发物的趋向性均有不同程度的提高，其中羽化后学习 4 天的趋向性达到显著，随着羽化天数的增加，川硬皮肿腿蜂对于混合挥发物的趋向性呈现先增高后降低的趋势，在羽化第四天达到最高随后呈下降趋势，与未学习组相比趋向性有明显提高。（如图 5.1）日龄 实验组 对照组 X2检验 P 值Day-old E group CK X2test Value of P
【参考文献】：
期刊论文
[1]基于转录组测序的紫色秋葵花青素合成相关基因研究[J]. 张少平,应璐,邱珊莲,张帅,洪建基,郑开斌,余文权. 福建农业学报. 2018(05)
[2]石斛小菇促进天麻种子萌发的转录组研究[J]. 曾旭,杨建文,凌鸿,张盈,郭顺星. 菌物学报. 2018(01)
[3]银杏性别决定相关基因的筛选[J]. 唐海霞,杜淑辉,邢世岩,桑亚林,李际红,刘晓静,孙立民. 林业科学. 2017(02)
[4]虫害诱导果实挥发物对蝇蛹金小蜂趋性行为的影响及其成分初步鉴定[J]. 赵海燕,梁广文,陆永跃. 植物保护. 2016(04)
[5]α硫辛酸对阿尔茨海默病模型大鼠海马区PKA-CREB信号通路的影响[J]. 杨丽萍,凌书建,张国华,王珊. 山东医药. 2015(36)
[6]白蜡吉丁啮小蜂雌蜂对寄主挥发物的触角电位和行为反应[J]. 高宇,王志英,赵红盈,唐大伟. 江苏农业科学. 2015(01)
[7]利用天敌防治松墨天牛研究进展[J]. 阳飞,钟安建,申艳,胡兰梅,唐艳龙. 生物灾害科学. 2014(04)
[8]基于新一代测序技术的昆虫转录组学研究进展[J]. 张棋麟,袁明龙. 昆虫学报. 2013(12)
[9]草地螟阿格姬蜂成虫对不同寄主的趋性行为测定[J]. 徐忠宝,刘爱萍,高书晶,徐林波,特木儿,崔智林. 环境昆虫学报. 2013(06)
[10]应用生物农药防治蔬菜病虫害的技术要点[J]. 韩文兰,王成云,张焕柱. 长江蔬菜. 2012(18)
博士论文
[1]昆虫CREB激活机制及Arrestin蛋白功能的研究[D]. 杨慧鹏.浙江大学 2013
[2]亚洲小车蝗生境适应性及代谢相关基因研究[D]. 张未仲.中国农业科学院 2013
[3]云斑天牛触角cDNA文库的构建及相关嗅觉蛋白的表达及功能分析[D]. 李慧.华中农业大学 2012
[4]粉蝶盘绒茧蜂和微红盘绒茧蜂的记忆机理与种间差异[D]. 王国红.北京林业大学 2008
硕士论文
[1]孕期高糖饮食对老年子代大鼠学习和记忆的影响及相关机制的研究[D]. 何阿信.苏州大学 2017
[2]松褐天牛气味结合蛋白基因的克隆与功能分析[D]. 王娟.华中农业大学 2015
[3]学习经历对川硬皮肿腿蜂气味结合蛋白表达的影响[D]. 陈春燕.四川农业大学 2015
[4]成年大鼠单侧海马损伤对对侧海马突触可塑性和空间学习记忆的影响[D]. 李宏杰.重庆医科大学 2014
[5]桑天牛成虫的生物生态学与植物源引诱剂研究[D]. 张琳.北京林业大学 2012
[6]拟黑多刺蚁CREB基因的mRNA水平表达研究[D]. 李青.陕西师范大学 2009
[7]川硬皮肿腿蜂实验种群生命表及成虫贮藏条件的研究[D]. 杨华.四川农业大学 2008
[8]川硬皮肿腿蜂复壮技术研究[D]. 胡霞.四川农业大学 2006
[9]川硬皮肿腿蜂学习行为及松节油定向培育研究[D]. 谢正华.四川农业大学 2005
[10]人类基因CREB4的功能初步研究[D]. 高永娟.华东师范大学 2005
本文编号：3474671
【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Y型嗅觉仪构造图
11Qubie对RNA浓度进行精确定量；Agilent2100精确检测RNA的完整性。4.3.2文库构建与质量检验图4.2文库构建原理图Fig.4.2Libraryconstructionschematicdiagram如图4.2所示，样品质量检测合格后，用含多胸腺嘧啶的磁珠富集川硬皮肿腿蜂的基因，加入裂解缓冲液将基因分成短片段，然后以短片段核糖核酸为模板，加入六碱基随机引物和逆转录酶合成基因第一链，通过试剂盒加入三磷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸、DNA聚合酶Ⅰ、糖核酸酶H以及缓冲液合成第二链cDNA，双链cDNA通过加入AMPureXP珠纯化。为纯化后的双链cDNA加上A尾，连接测序接头，末端修复。随后，进行PCR扩增，产物使用AMPureXPbeads纯化，以获取文库。对构建成功的文库首先使用Qubit2.0定量测定，而后稀释到1.5ng/ul，使用Agilent2100进行插入尺寸检测，最后使用荧光定量PCR对文库进行定量测定，以保证浓度＞2nM供试。4.3.3测序将通过质检的文库按有效浓度和预计数据量结合后进行IlluminaHiSeq2000测
5.1.1 混合挥发物对比同一日龄的有、无学习经历的川硬皮肿腿蜂，经 X2检验结果显示：与未经历气味学习的川硬皮肿腿蜂相比，学习后的川硬皮肿腿蜂对混合挥发物的趋向性均有不同程度的提高，其中羽化后学习 4 天的趋向性达到显著，随着羽化天数的增加，川硬皮肿腿蜂对于混合挥发物的趋向性呈现先增高后降低的趋势，在羽化第四天达到最高随后呈下降趋势，与未学习组相比趋向性有明显提高。（如图 5.1）日龄 实验组 对照组 X2检验 P 值Day-old E group CK X2test Value of P
【参考文献】：
期刊论文
[1]基于转录组测序的紫色秋葵花青素合成相关基因研究[J]. 张少平,应璐,邱珊莲,张帅,洪建基,郑开斌,余文权. 福建农业学报. 2018(05)
[2]石斛小菇促进天麻种子萌发的转录组研究[J]. 曾旭,杨建文,凌鸿,张盈,郭顺星. 菌物学报. 2018(01)
[3]银杏性别决定相关基因的筛选[J]. 唐海霞,杜淑辉,邢世岩,桑亚林,李际红,刘晓静,孙立民. 林业科学. 2017(02)
[4]虫害诱导果实挥发物对蝇蛹金小蜂趋性行为的影响及其成分初步鉴定[J]. 赵海燕,梁广文,陆永跃. 植物保护. 2016(04)
[5]α硫辛酸对阿尔茨海默病模型大鼠海马区PKA-CREB信号通路的影响[J]. 杨丽萍,凌书建,张国华,王珊. 山东医药. 2015(36)
[6]白蜡吉丁啮小蜂雌蜂对寄主挥发物的触角电位和行为反应[J]. 高宇,王志英,赵红盈,唐大伟. 江苏农业科学. 2015(01)
[7]利用天敌防治松墨天牛研究进展[J]. 阳飞,钟安建,申艳,胡兰梅,唐艳龙. 生物灾害科学. 2014(04)
[8]基于新一代测序技术的昆虫转录组学研究进展[J]. 张棋麟,袁明龙. 昆虫学报. 2013(12)
[9]草地螟阿格姬蜂成虫对不同寄主的趋性行为测定[J]. 徐忠宝,刘爱萍,高书晶,徐林波,特木儿,崔智林. 环境昆虫学报. 2013(06)
[10]应用生物农药防治蔬菜病虫害的技术要点[J]. 韩文兰,王成云,张焕柱. 长江蔬菜. 2012(18)
博士论文
[1]昆虫CREB激活机制及Arrestin蛋白功能的研究[D]. 杨慧鹏.浙江大学 2013
[2]亚洲小车蝗生境适应性及代谢相关基因研究[D]. 张未仲.中国农业科学院 2013
[3]云斑天牛触角cDNA文库的构建及相关嗅觉蛋白的表达及功能分析[D]. 李慧.华中农业大学 2012
[4]粉蝶盘绒茧蜂和微红盘绒茧蜂的记忆机理与种间差异[D]. 王国红.北京林业大学 2008
硕士论文
[1]孕期高糖饮食对老年子代大鼠学习和记忆的影响及相关机制的研究[D]. 何阿信.苏州大学 2017
[2]松褐天牛气味结合蛋白基因的克隆与功能分析[D]. 王娟.华中农业大学 2015
[3]学习经历对川硬皮肿腿蜂气味结合蛋白表达的影响[D]. 陈春燕.四川农业大学 2015
[4]成年大鼠单侧海马损伤对对侧海马突触可塑性和空间学习记忆的影响[D]. 李宏杰.重庆医科大学 2014
[5]桑天牛成虫的生物生态学与植物源引诱剂研究[D]. 张琳.北京林业大学 2012
[6]拟黑多刺蚁CREB基因的mRNA水平表达研究[D]. 李青.陕西师范大学 2009
[7]川硬皮肿腿蜂实验种群生命表及成虫贮藏条件的研究[D]. 杨华.四川农业大学 2008
[8]川硬皮肿腿蜂复壮技术研究[D]. 胡霞.四川农业大学 2006
[9]川硬皮肿腿蜂学习行为及松节油定向培育研究[D]. 谢正华.四川农业大学 2005
[10]人类基因CREB4的功能初步研究[D]. 高永娟.华东师范大学 2005
本文编号：3474671
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3474671.html
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