枯草芽孢杆菌S1-4的ARTP诱变、发酵条件优化及BsuKER-68基因的克隆与表达
发布时间：2021-11-04 02:18
碱性蛋白酶广泛应用于洗涤剂、食品、制药、皮革、诊断、废物管理和白银回收等行业,具有重要的商业价值。本文重点研究了碱性蛋白酶生产菌种的诱变筛选、微生物碱性蛋白酶的生产和发酵优化及碱性蛋白酶基因的克隆与表达。本研究利用常压室温等离子体诱变技术对B.subtilis S1-4菌株进行诱变,以He作为放电气体,气体流量为10 L/min,射频功率为120 W,诱变时间为20 s、40 s、60 s、80 s。通过酪蛋白平板初筛,挑出水解圈较大的14株突变株,再通过实验室摇瓶复筛得到一株高产碱性蛋白酶菌株。经形态观察和16S rDNA序列的比较分析,将其命名为B.subtilis S1-4-2-21,其碱性蛋白酶活力最高可达25.4 U/mL,相比原始菌株酶活力提高了约2倍,羽毛降解率提高了4.33%。将酶活力最高的突变株B.subtilis S1-4-2-21进行全基因组重测序,与野生菌株的参考基因组进行比较,SNP突变主要发生在A-C碱基和A-G碱基之间,非同义突变占14%,大部分的SNP突变发生在基因间序列。InDel突变主要发生在Shift,CDS区域序列,该区域可以引起移码突变。结构性...
【文章来源】：四川师范大学四川省
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
枯草芽孢杆菌S1-4的生长曲线
图 2.2 枯草芽孢杆菌 S1-4 的酶活力曲线Fig.2.2 Enzyme activity curve of B. subtilis S1-4杆菌 S1-4 的鸡毛失重率曲线 LB 培养基中培养 120 h，每隔 24 h 取样，测定其鸡毛的降可以看出，在 0-72 h 鸡毛降解率在 30%左右；在 72 h 后，
图 2.3 枯草芽孢杆菌 S1-4 鸡毛降解率曲线Fig.2.3 Degradation rate curve of B. subtilis S1-4 chicken hairs的致死率曲线可以看出，ARTP 诱变具有较高的杀菌能力，诱变时间致死率有利于筛选优良菌株，但是诱变时间过长，一些
【参考文献】：
期刊论文
[1]常压室温等离子体诱变选育他克莫司高产菌株及发酵条件优化[J]. 王会会,秦丽娜,刘雨,赵建辉,张雪霞. 中国抗生素杂志. 2018(12)
[2]原生质体ARTP诱变选育阿维拉霉素高产菌株[J]. 蒋顺进. 中国抗生素杂志. 2018(07)
[3]基于RAD重测序技术开发烟草品种SNP位点[J]. 任民,程立锐,刘旦,蒋彩虹,杨爱国. 中国烟草科学. 2018(03)
[4]枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶基因在酿酒酵母中的表达和应用[J]. 张若兰,刘庆国,王敏,汪琨,朱廷恒. 食品与发酵工业. 2018(07)
[5]基于名优谷子品种晋谷21全基因组重测序的分子标记开发[J]. 赵庆英,张瑞娟,王瑞良,高建华,韩渊怀,杨致荣,王兴春. 作物学报. 2018(05)
[6]埃及伊蚊丝氨酸蛋白酶抑制剂23的基因克隆表达与多克隆抗体制备[J]. 翟慧,王政艳,吕清巧,程金芝,李世琪,杨茜,商正玲,吴家红. 寄生虫与医学昆虫学报. 2017(04)
[7]工业枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶基因克隆及分析[J]. 王琳. 科技资讯. 2017(35)
[8]海洋贝类肠道弧菌21Z1碱性蛋白酶的分离纯化及酶学性质[J]. 胡志恒,李玉梅,李强. 济南大学学报(自然科学版). 2018(01)
[9]常压常温等离子体（ARTP）诱变选育顶头孢霉高产菌[J]. 李英英,杭海峰,庄英萍,储炬. 中国抗生素杂志. 2017(11)
[10]体外培养胎鼠心肌细胞方法的优化[J]. 孙凤杰,佟德民,卢小炎,董文斌,邓长柏. 细胞与分子免疫学杂志. 2017(11)
博士论文
[1]不同基因型弓形虫多组学分析及其对小鼠肝脾代谢组的影响[D]. 陈小庆.吉林农业大学 2018
[2]脱毛蛋白酶产生菌的选育及其碱性蛋白酶基因的克隆与表达[D]. 王海燕.四川大学 2006
[3]短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）的碱性蛋白酶基因的表达研究[D]. 潘皎.四川大学 2004
硕士论文
[1]抗大豆孢囊线虫4号生理小种的PI437654突变体的筛选与全基因组测序[D]. 葛逢勇.中国农业科学院 2018
[2]一株致严重呼吸道疾病新的树鼩腺病毒分离鉴定及全基因组序列解析[D]. 宋庆凯.北京协和医学院 2018
[3]ARTP诱变与基因定向改造选育腺苷高稳产菌株[D]. 任韶霞.河南师范大学 2017
[4]迟钝爱德华氏菌生物被膜状态下耐药相关基因与蛋白的研究[D]. 孙莉娜.福建农林大学 2016
[5]一株来自海洋淤泥的铜绿假单胞菌株DES-3的鉴定及基因ap02对其产碱性蛋白酶的影响研究[D]. 刘瑶.广西大学 2015
[6]碱性蛋白酶的分离纯化及其酶学特性的研究[D]. 杨丽媛.东北师范大学 2015
[7]高产雄甾-4-烯-3,17-二酮新金色分枝杆菌的选育及发酵条件优化[D]. 刘超.江南大学 2015
[8]曲酸高产菌株的诱变选育及工艺优化[D]. 倪君.河南大学 2015
[9]碱性蛋白酶产生菌SD11的鉴定和酶的分离纯化及特性研究[D]. 杨慕瑒.燕山大学 2015
[10]高产碱性蛋白酶菌种的选育及发酵过程优化[D]. 孙倩.河南工业大学 2012
本文编号：3474797
【文章来源】：四川师范大学四川省
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
枯草芽孢杆菌S1-4的生长曲线
图 2.2 枯草芽孢杆菌 S1-4 的酶活力曲线Fig.2.2 Enzyme activity curve of B. subtilis S1-4杆菌 S1-4 的鸡毛失重率曲线 LB 培养基中培养 120 h，每隔 24 h 取样，测定其鸡毛的降可以看出，在 0-72 h 鸡毛降解率在 30%左右；在 72 h 后，
图 2.3 枯草芽孢杆菌 S1-4 鸡毛降解率曲线Fig.2.3 Degradation rate curve of B. subtilis S1-4 chicken hairs的致死率曲线可以看出，ARTP 诱变具有较高的杀菌能力，诱变时间致死率有利于筛选优良菌株，但是诱变时间过长，一些
【参考文献】：
期刊论文
[1]常压室温等离子体诱变选育他克莫司高产菌株及发酵条件优化[J]. 王会会,秦丽娜,刘雨,赵建辉,张雪霞. 中国抗生素杂志. 2018(12)
[2]原生质体ARTP诱变选育阿维拉霉素高产菌株[J]. 蒋顺进. 中国抗生素杂志. 2018(07)
[3]基于RAD重测序技术开发烟草品种SNP位点[J]. 任民,程立锐,刘旦,蒋彩虹,杨爱国. 中国烟草科学. 2018(03)
[4]枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶基因在酿酒酵母中的表达和应用[J]. 张若兰,刘庆国,王敏,汪琨,朱廷恒. 食品与发酵工业. 2018(07)
[5]基于名优谷子品种晋谷21全基因组重测序的分子标记开发[J]. 赵庆英,张瑞娟,王瑞良,高建华,韩渊怀,杨致荣,王兴春. 作物学报. 2018(05)
[6]埃及伊蚊丝氨酸蛋白酶抑制剂23的基因克隆表达与多克隆抗体制备[J]. 翟慧,王政艳,吕清巧,程金芝,李世琪,杨茜,商正玲,吴家红. 寄生虫与医学昆虫学报. 2017(04)
[7]工业枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶基因克隆及分析[J]. 王琳. 科技资讯. 2017(35)
[8]海洋贝类肠道弧菌21Z1碱性蛋白酶的分离纯化及酶学性质[J]. 胡志恒,李玉梅,李强. 济南大学学报(自然科学版). 2018(01)
[9]常压常温等离子体（ARTP）诱变选育顶头孢霉高产菌[J]. 李英英,杭海峰,庄英萍,储炬. 中国抗生素杂志. 2017(11)
[10]体外培养胎鼠心肌细胞方法的优化[J]. 孙凤杰,佟德民,卢小炎,董文斌,邓长柏. 细胞与分子免疫学杂志. 2017(11)
博士论文
[1]不同基因型弓形虫多组学分析及其对小鼠肝脾代谢组的影响[D]. 陈小庆.吉林农业大学 2018
[2]脱毛蛋白酶产生菌的选育及其碱性蛋白酶基因的克隆与表达[D]. 王海燕.四川大学 2006
[3]短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）的碱性蛋白酶基因的表达研究[D]. 潘皎.四川大学 2004
硕士论文
[1]抗大豆孢囊线虫4号生理小种的PI437654突变体的筛选与全基因组测序[D]. 葛逢勇.中国农业科学院 2018
[2]一株致严重呼吸道疾病新的树鼩腺病毒分离鉴定及全基因组序列解析[D]. 宋庆凯.北京协和医学院 2018
[3]ARTP诱变与基因定向改造选育腺苷高稳产菌株[D]. 任韶霞.河南师范大学 2017
[4]迟钝爱德华氏菌生物被膜状态下耐药相关基因与蛋白的研究[D]. 孙莉娜.福建农林大学 2016
[5]一株来自海洋淤泥的铜绿假单胞菌株DES-3的鉴定及基因ap02对其产碱性蛋白酶的影响研究[D]. 刘瑶.广西大学 2015
[6]碱性蛋白酶的分离纯化及其酶学特性的研究[D]. 杨丽媛.东北师范大学 2015
[7]高产雄甾-4-烯-3,17-二酮新金色分枝杆菌的选育及发酵条件优化[D]. 刘超.江南大学 2015
[8]曲酸高产菌株的诱变选育及工艺优化[D]. 倪君.河南大学 2015
[9]碱性蛋白酶产生菌SD11的鉴定和酶的分离纯化及特性研究[D]. 杨慕瑒.燕山大学 2015
[10]高产碱性蛋白酶菌种的选育及发酵过程优化[D]. 孙倩.河南工业大学 2012
本文编号：3474797
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