软枣猕猴桃果胶分解酶基因克隆及表达量分析

发布时间：2021-11-07 05:01

　　以不同软化阶段的软枣猕猴桃果实为试材,采用分光光度法测定了多聚半乳糖醛酸酶（Polygalacturonase,PG）、β-半乳糖苷酶（β-galactosidase,β-gal）和果胶甲酯酶（Pectin methylesterase,PME）活性,采用RT-PCR法对其控制基因克隆,并对不同成熟阶段的表达进行了分析,以期探讨软枣猕猴桃果实软化机理。结果表明:软枣猕猴桃果实软化中PME和β-gal在软化初期出现活性高峰,PG在软化期形成活性高峰,而且成功克隆得到了软枣猕猴桃PG和β-gal的基因序列。NCBI Blast结果表明与中华猕猴桃PG基因和β-gal基因的一致性分别大于95%和90%。PG基因的半定量分析表明PG基因的转录表达与PG活性协同一致,说明在软枣猕猴桃果实中PG基因的表达是转录水平上调控的;而β-gal基因的半定量分析表明β-gal活性波峰结果一致,但是与果实软化过程中β-gal保持较高的酶活性结果不一致,说明β-gal基因的表达不仅受到转录水平的调控,还可能受到翻译水平上的调控。 

【文章来源】：北方园艺. 2020,(15)北大核心

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

软枣猕猴桃果实软化过程中PG和

β-gal是起水解果胶支链分子半乳聚糖的作用,所以预测在一部分作物组织软化中的作用比PG重要[15]。由图2可知,软枣猕猴桃果实软化过程中保持较高的β-gal活性并在软化初期出现活性高峰,说明β-gal也是软枣猕猴桃果实果胶分解的主要酶。2.3 控制软枣猕猴桃果实软化的主要酶基因克隆及表达量分析

提取了软枣猕猴桃总RNA,根据已报道的其它植物的PG基因序列,设计了软枣猕猴桃PG基因的特异引物(Pgu4:atttgttaggggtgtgctct,Pgd4:ttgagggcttaactaaacca),进行RT-PCR、克隆得到了其PG的基因序列。NCBI Blast结果表明与中华猕猴桃PG基因的一致性大于95%,且包含所设计特异引物序列(图3中的方框部分),表明了所克隆基因序列的正确性。图4 软枣猕猴桃果实软化过程中PG基因表达量变化

【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
[1]软枣猕猴桃采后生理及软化差异蛋白质组学和PG酶学性质[D]. 李书倩.沈阳农业大学 2014



本文编号：3481214