云红梨1号HY5基因原核表达载体的构建、表达和纯化

发布时间：2021-11-11 09:02

　　HY5为调控光形态建成的转录因子,调控花青素的生物合成与累积。通过构建云红梨1号HY5基因的原核表达载体,旨在为研究HY5蛋白的生物功能奠定基础。将云红梨1号的HY5基因构建到原核表达载体pGEX-4T-1上,并对其进行诱导表达,通过谷胱甘肽-S-转移酶（GST）亲和层析色谱柱纯化融合蛋白。结果表明,重组质粒pGEX-4T-1-PyHY5的酶切检测及测序结果均正确,表明重组质粒载体构建成功。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）结果显示,用100 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）在37℃、220 r/min条件下诱导3 h后收集诱导菌株,在BL21菌株中均有明显的目的条带,诱导表达后的融合蛋白大小约为43.90 ku;PyHY5蛋白能够与pGEX-4T-1载体上的GST标签蛋白进行融合表达。通过研究成功构建了pGEX-4T-1-PyHY5原核表达载体,诱导表达并纯化出PyHY5融合蛋白为进一步研究其生物学功能奠定了基础。 

【文章来源】：江苏农业科学. 2020,48(20)

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 试验材料
        1.1.1 试验材料
        1.1.2 主要试剂
        1.1.3 主要仪器与设备
    1.2 试验方法
        1.2.1 云红梨1号HY5基因的克隆
        1.2.2 PyHY5基因和pGEX-4T-1载体的双酶切
        1.2.3 pGEX-4T-1-PyHY5原核表达载体的构建
        1.2.4 pGEX-4T-1-PyHY5原核表达载体的诱导表达
            1.2.4.1 蛋白的小量表达
            1.2.4.2 蛋白的大量表达
            1.2.4.3 蛋白可溶性的鉴定
        1.2.5 pGEX-4T-1-PyHY5原核表达蛋白的纯化
2 结果与分析
    2.1 pGEX-4T-1-PyHY5原核表达载体的构建
    2.2 pGEX-4T-1-PyHY5原核表达载体的表达
    2.3 pGEX-4T-1-PyHY5原核表达蛋白的可溶性鉴定
    2.4 pGEX-4T-1-PyHY5原核表达蛋白的纯化
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]光调控因子HY5及HYH在蔗糖诱导花青素积累中作用[J]. 王立光,李静雯,叶春雷,陈军,罗俊杰.  甘肃农业科技. 2019(01)
[2]转录因子HY5在植物光形态建成和氮代谢中的调控作用[J]. 王志冉,王红艳,邓海峰,许传强.  中国蔬菜. 2018(05)
[3]红皮梨研究进展[J]. 薛华柏,王芳芳,杨健,王龙,王苏珂,苏艳丽,乔玉山,李秀根.  果树学报. 2016(S1)
[4]油菜HY5基因的电子克隆及生物信息学分析[J]. 郭继平.  北方园艺. 2013(23)
[5]大豆GmNAC8基因克隆与原核表达[J]. 刘晓庆,徐照龙,许玲,黄益洪,何晓兰,张大勇,马鸿翔.  江苏农业学报. 2013(04)
[6]云南红梨的引种试验及栽培技术[J]. 王荔,马玉华,杨胜俊,杨永英.  贵州农业科学. 2012(03)
[7]GRIM-19原核表达载体的构建及GST-GRIM-19的诱导表达与纯化[J]. 朱靖,周颖,王青元,冯定庆,朱园园,李彩荣,凌斌.  安徽医科大学学报. 2011(05)
[8]植物HY5蛋白结构与功能的研究进展[J]. 张荔,周波,李玉花.  植物生理学通讯. 2010(10)
[9]梨品种满天红和美人酥在河西走廊的引种试验[J]. 张红菊,宋振东.  中国果树. 2010(04)
[10]3个红色梨新品种在河南的表现[J]. 魏闻东,田鹏,金新富,王晓富,冯有才,孙共明.  中国果树. 2009(01)

博士论文
[1]可用作生物杀虫剂的家蚕核型多角体病毒orf65、orf91的基因功能分析[D]. 唐琦.江苏大学 2013

硕士论文
[1]中国鲜梨国际竞争力研究[D]. 杜葳.东北农业大学 2016



本文编号：3488581