花色相关基因DFR的RNAi载体构建
发布时间：2021-11-13 04:31
以野生圆叶牵牛（Pharbitis purpurea（L.）Voisgt）PpDFR基因ORF区内539bp-939bp区段作为最佳RNA干扰（RNA interference,RNAi）靶序列,克隆该区段并将其插入p BWA（V）KS载体,构建DFR基因的干扰载体,命名为pBWA（V）KS-Pp DFR。本研究为鉴定二氢黄酮4-还原酶（dihydroflavonol4-reductase,DFR）基因在色素合成过程中的功能及定向创造植物新种质奠定基础。
【文章来源】：现代园艺. 2020,43(21)
【文章页数】：2 页
【部分图文】：
目的基因PCR扩增
3.2 DFR的RNAi载体构建构建的DFR基因的RNAi载体质粒37℃酶切2h后电泳图条带清晰，和目的基因片段及载体序列大小大致吻合，初步确定目的基因片段已连接带质粒载体上。经测序后，所测得的序列与目的基因片段序列吻合，由此说明成功构建了DFR基因的RNAi载体，P-r DNAtlt3-p BWA (V)KS-cc DB。DFR基因RNAi表达载体的结构如图3。
不同的植物DFR基因的表达不同，同一植物不同组织和不同发育期，其表达量也不同，这说明DFR基因的表达存在特异性。菊花的DFR基因的表达量随着开花时间的延长逐渐降低[9]；常春藤的DFR基因发在其幼苗生长期的活性较高而成熟期不表达[10]；乌头的DFR基因在各器官表达量存在显著差异，在其花中活性最高，而在茎、叶和根中基因的表达量却非常少[11]。植物的DFR基因还受环境因子的变化而影响其活性。环境的变化主要是指光照、温度、电解离子浓度及p H值等的变化。有研究表明玫瑰昼夜温差为21℃培养3d,DFR的表达量下降[12]。当Ca2+浓度变大，DFR基因表达量升高[13]。本研究构建了圆叶牵牛DFR基因的RNAi载体，为进一步鉴定Pp DFR基因在花色素甘合成过程中的功能，揭示其与植物花色呈现的关系，培育花卉新品种奠定基础。
本文编号：3492325
【文章来源】：现代园艺. 2020,43(21)
【文章页数】：2 页
【部分图文】：
目的基因PCR扩增
3.2 DFR的RNAi载体构建构建的DFR基因的RNAi载体质粒37℃酶切2h后电泳图条带清晰，和目的基因片段及载体序列大小大致吻合，初步确定目的基因片段已连接带质粒载体上。经测序后，所测得的序列与目的基因片段序列吻合，由此说明成功构建了DFR基因的RNAi载体，P-r DNAtlt3-p BWA (V)KS-cc DB。DFR基因RNAi表达载体的结构如图3。
不同的植物DFR基因的表达不同，同一植物不同组织和不同发育期，其表达量也不同，这说明DFR基因的表达存在特异性。菊花的DFR基因的表达量随着开花时间的延长逐渐降低[9]；常春藤的DFR基因发在其幼苗生长期的活性较高而成熟期不表达[10]；乌头的DFR基因在各器官表达量存在显著差异，在其花中活性最高，而在茎、叶和根中基因的表达量却非常少[11]。植物的DFR基因还受环境因子的变化而影响其活性。环境的变化主要是指光照、温度、电解离子浓度及p H值等的变化。有研究表明玫瑰昼夜温差为21℃培养3d,DFR的表达量下降[12]。当Ca2+浓度变大，DFR基因表达量升高[13]。本研究构建了圆叶牵牛DFR基因的RNAi载体，为进一步鉴定Pp DFR基因在花色素甘合成过程中的功能，揭示其与植物花色呈现的关系，培育花卉新品种奠定基础。
本文编号：3492325
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3492325.html
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