phf6基因在斑马鱼早期造血发生过程中的功能研究

发布时间：2021-11-15 03:38

　　造血包括原始造血和定向造血,是在有序且复杂的情况下发生的,该过程异常可能会导致各种类型的血液疾病。斑马鱼体型小,繁衍后代的能力强,胚胎在形态发生方面与人类极为相像,一些重要的调控因子和信号通路也非常保守,非常适合用于造血发育的研究。phf6基因的突变与多种血液疾病的发生有关。该基因所编码的蛋白在结构上拥有两个PHD结构域,突变多发生在这两个结构域内。虽然已有的研究表明phf6基因的突变与血液疾病的发生有一定的联系,但其具体的功能以及该基因是如何影响血液疾病发生的分子机制尚不明确。为了研究phf6基因在造血方面的作用,最初我们利用原位杂交检测了phf6基因的时空表达,然后进一步通过phf6的敲低与敲除实验来研究其在早期造血发生过程中的功能。首先将phf6 splicing morpholino与phf6 atg morpholino分别注射到斑马鱼单胞期胚胎中以降低phf6的表达,利用原位杂交、O-Dianisidine染色、中性红染色、qPCR等对不同造血时期特异性标记分子的表达进行检测,来探究phf6敲低后对早期造血发生的影响。结果表明,注射这两种morpholino后所检测的表型结... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

phf6ePHD2结构域（图文引自文献[1]

华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文phf6 突变与多种类型疾病的发生有关，起初是在 BFLS（B rjeson-ForssmLehman syndrome）中发现该基因存在突变，在诸如急性 T 淋巴细胞白血病 T-A等中也有发现其具有不同的突变情况，具体情况如图 1.2 所示 。该基因突变后会得其表达的蛋白无法发挥作用，进而引发各种血液性疾病。由于这个基因是在 X色体上，所以由该基因导致的疾病患者从性别上来看主要发生于男性，女性中也发生，但较之男性患者相对少些。

图 1.3 斑马鱼造血发育的具体时空表达情况（图片引自文献[46]）Figure 1.3 Spatial and temporal representation ofhematopoiesis in the zebrafish（cited from[46]）基于血液特异性标记分子的表达模式，红系细胞（E），髓系细胞（M）和血栓（T）谱系在 CHT 区发现。肾髓含有所有不同的血系，包括淋巴 B 细胞（L（B））谱系。淋巴样祖细胞（CLPs）在胸腺中成熟为淋巴 T 细胞（L（T））。24hpf 胚胎（左）和 72hpf 幼鱼（右）描绘了造血的不同部位。底部横轴显示了不同部位血液特异性标记分子表达的时间轴。重要的特异性标志分子显示在上图的四方框中。中胚层细胞（白色框和灰色箭头）在 ALM、PLM / ICM、PBI 和 AGM 区分化形成四种不同的血液祖细胞。血液循环开始于大约 24hpf（红线及箭头所示）。大约 33hpf， AGM 区祖细胞开始进入循环，48hpf 时，这些祖细胞开始迁移至 CHT 区和肾脏（黑色箭头）。54hpf 时，来自 AGM 区的 CLPs 开始迁移至胸腺。 CHT 区是定向造血的中间位点，接着造血从幼体阶段进入到成熟肾脏，肾脏是造血的主要部位。胸腺是淋巴 T 细胞成熟的部位，而 CLPs 与成人中的其他血液祖细胞一样，起源于肾脏。


本文编号：3495951