诺如病毒基因工程疫苗中残余宿主DNA实时荧光定量PCR检测方法的建立及验证

发布时间：2021-11-15 07:43

　　目的建立汉逊酵母表达的重组诺如病毒基因工程疫苗中残余宿主DNA实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR,qPCR）检测方法,并进行验证。方法采用磁珠法提取汉逊酵母基因组DNA,获得标准品,建立q PCR标准曲线,并进行专属性、线性、准确度、精密度和耐用性验证。结果专属性验证结果显示,与对照制剂（注射用水、缓冲液、Vero细胞和CHO细胞培养上清DNA）相比,建立的方法对汉逊酵母DNA具有特异性扩增曲线;线性验证中5次试验标准曲线相关系数（R2）均> 0.98;准确度验证试验不同浓度样品的加标回收率在95.12%～105.72%之间,均在70%～130%范围内;重复性和中间精密度验证试验相对标准偏差（RSD）均小于30%;耐用性验证中,Proteinase K不同消化温度下检测结果的RSD为20.75%,不同蛋白浓度供试品检测结果的RSD为27.11%,均符合《中国药典》三部（2015版）要求。结论建立的方法专属性、线性、准确度、精密度和耐用性均符合要求,可用于检测重组诺如病毒类病毒颗粒（virus-like particle,VLP）疫苗中残余宿主... 

【文章来源】：中国生物制品学杂志. 2020,33(12)CSCD

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【部分图文】：

q PCR的扩增曲线（A）和标准曲线的拟合曲线（B)

重组诺如病毒VLP提取后，经q PCR检测其残余DNA含量，获得了经典的q PCR扩增曲线，DNA含量为14 pg/μL；而CHO细胞培养上清、Vero细胞培养上清、缓冲液和水采用同样步骤提取DNA后经q PCR扩增，均未出现经典的扩增曲线，结果均为阴性。见图2。表明该方法检测汉逊酵母残余DNA专属性良好。2.2.2 线性

检测方法的线性验证拟合曲线图


本文编号：3496344