维氏气单胞菌TH0426 rpoN与rpoE基因缺失株的构建及功能的初探
发布时间：2021-11-15 07:50
维氏气单胞菌（Aeromonas veroni,A.veronii）是一种重要的人—兽—水生动物共患致病菌,研究显示近来毒力呈逐年上升趋势,已被越来越多的学者重视,但对于A.veronii毒力方面研究较少,对于毒力基因的研究有助于对A.veronii的致病机制的研究提供理论依据。对于rpoN基因的研究最早见于1985年,近年来有关rpoN的研究报道逐年增多,它能够控制多个功能基因的转录表达,包括氮代谢、逆迫应答、碳源利用、运动及毒力等基因的表达,在很多细菌中发挥至关重要的作用。因此试验选取rpoN基因作为敲除对象,应用基于自杀性质粒的同源重组技术分别构建A.veronii TH0426株rpoN的缺失株△rpoN,以及其互补株C-rpoN,并对上述菌进行部分生物学特性分析。结果显示,在生长曲线、溶血活性方面,三者未见明显区别;菌落形态上,缺失株△rpoN呈明显波浪状边缘,互补株C-rpoN恢复至野生株表面光滑,边缘整齐的状态;斑马鱼半数致死量测定结果显示缺失株△rpoN的LD50比野生株升高了22.9倍,小鼠的LD50升高3.06倍,毒力显著...
【文章来源】：吉林农业大学吉林省
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
A.veroniiTH0426株rpoN基因敲除流程图
图 1.2 rpoN 基因上下游基因的扩增及连接A:rpoN 上游基因；B:rpoN 下游基因；C:rpoN 上下游基因连接（UD rpoN）Fig. 1.2 Amplification and connection of rpoN upstream and downstream upstram gene:B: rpoN downstream gene:C: rpoN upstream and downstream gerpoN）用限制性内切酶 XbaI 和 SacI 酶切重组质粒 pEASY-UD rpoN 和自E112（图 1.3AB）后连接，构建重组自杀性质粒 pRE112-UD rpo物 pRE112-F/pRE112-R 和 rpoN-for/rpoN-rev 引物进行检测并测序正确（图 1.3 C）。
图 1.2 rpoN 基因上下游基因的扩增及连接A:rpoN 上游基因；B:rpoN 下游基因；C:rpoN 上下游基因连接（UD rpoN）；Fig. 1.2 Amplification and connection of rpoN upstream and downstreampoN upstram gene:B: rpoN downstream gene:C: rpoN upstream and downstream generpoN）利用限制性内切酶 XbaI 和 SacI 酶切重组质粒 pEASY-UD rpoN 和自杀RE112（图 1.3AB）后连接，构建重组自杀性质粒 pRE112-UD rpoN，引物 pRE112-F/pRE112-R 和 rpoN-for/rpoN-rev 引物进行检测并测序,结正确（图 1.3 C）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]细菌RpoN蛋白的研究进展[J]. 王冬雪,夏明,孟庆峰,单晓枫. 中国动物传染病学报. 2019(02)
[2]利用CRISPR/Cas9技术构建FHL1基因敲除的HepG2稳定细胞株及其功能鉴定[J]. 张亚楠,常振宇,刘婕,丁丽华,叶棋浓. 生物技术通讯. 2018(06)
[3]维氏气单胞菌胞外产物免疫反应蛋白的筛选[J]. 单晓枫,毕建飞,张冬星,陈龙,康元环,吴同垒,孙武文,钱爱东. 中国兽医科学. 2018(01)
[4]固氮施氏假单胞菌RpoN蛋白对鞭毛合成的影响[J]. 李耘,刘晓东,李琴,战嵛华,燕永亮,陆伟. 中国农业科技导报. 2017(11)
[5]黄颡鱼“溃疡综合征”病原的分离鉴定及药敏试验[J]. 徐洋,蔺凌云,姚嘉赟,盛鹏程,潘晓艺,尹文林,沈锦玉. 淡水渔业. 2015(05)
[6]维氏气单胞菌鞭毛蛋白flaA的克隆及原核表达[J]. 翟新新,温振才,沈雪飞,孙真,贾生美,张俊辉,王文东,杨振国,卢强. 中国畜牧兽医. 2014(07)
[7]溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统分子伴侣护航蛋白VscO的基因克隆及其生物信息学分析[J]. 庞欢瑛,周泽军,丁燏,黄郁葱,吴灶和,简纪常. 生物技术通报. 2014(06)
[8]罗非鱼维氏气单胞菌的分离鉴定和药敏试验[J]. 黎炯,叶星,卢迈新,邓国成,迟妍妍,黄樟翰. 水生态学杂志. 2011(03)
[9]中华绒螯蟹病原维氏气单胞菌的检验[J]. 房海,陈翠珍,张晓君,巩元芳,葛慕湘. 中国人兽共患病学报. 2008(01)
[10]260株气单胞菌的表型特性与毒素原性研究[J]. 崔树玉,孙启华,李景学,周国清,李爱萍,张志国. 微生物学通报. 1997(04)
博士论文
[1]RpoE在伤寒沙门菌克服环境高渗应激中的基因表达调节机制研究[D]. 杜鸿.江苏大学 2012
硕士论文
[1]维氏气单胞菌胞外产物蛋白分析及hisJ基因功能的初步研究[D]. 张海朋.吉林农业大学 2018
[2]固氮施氏假单胞菌RpoN蛋白调控硝酸盐同化的作用机制[D]. 李耘.中国农业科学院 2016
[3]迟钝爱德华氏菌EIB202 Sigma（54）编码基因rpoN的敲除及功能研究[D]. 王克平.华东理工大学 2012
[4]四川地区斑点叉尾鮰几种重要细菌性疾病病原检测及病原特性研究[D]. 范方玲.四川农业大学 2010
本文编号：3496355
【文章来源】：吉林农业大学吉林省
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
A.veroniiTH0426株rpoN基因敲除流程图
图 1.2 rpoN 基因上下游基因的扩增及连接A:rpoN 上游基因；B:rpoN 下游基因；C:rpoN 上下游基因连接（UD rpoN）Fig. 1.2 Amplification and connection of rpoN upstream and downstream upstram gene:B: rpoN downstream gene:C: rpoN upstream and downstream gerpoN）用限制性内切酶 XbaI 和 SacI 酶切重组质粒 pEASY-UD rpoN 和自E112（图 1.3AB）后连接，构建重组自杀性质粒 pRE112-UD rpo物 pRE112-F/pRE112-R 和 rpoN-for/rpoN-rev 引物进行检测并测序正确（图 1.3 C）。
图 1.2 rpoN 基因上下游基因的扩增及连接A:rpoN 上游基因；B:rpoN 下游基因；C:rpoN 上下游基因连接（UD rpoN）；Fig. 1.2 Amplification and connection of rpoN upstream and downstreampoN upstram gene:B: rpoN downstream gene:C: rpoN upstream and downstream generpoN）利用限制性内切酶 XbaI 和 SacI 酶切重组质粒 pEASY-UD rpoN 和自杀RE112（图 1.3AB）后连接，构建重组自杀性质粒 pRE112-UD rpoN，引物 pRE112-F/pRE112-R 和 rpoN-for/rpoN-rev 引物进行检测并测序,结正确（图 1.3 C）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]细菌RpoN蛋白的研究进展[J]. 王冬雪,夏明,孟庆峰,单晓枫. 中国动物传染病学报. 2019(02)
[2]利用CRISPR/Cas9技术构建FHL1基因敲除的HepG2稳定细胞株及其功能鉴定[J]. 张亚楠,常振宇,刘婕,丁丽华,叶棋浓. 生物技术通讯. 2018(06)
[3]维氏气单胞菌胞外产物免疫反应蛋白的筛选[J]. 单晓枫,毕建飞,张冬星,陈龙,康元环,吴同垒,孙武文,钱爱东. 中国兽医科学. 2018(01)
[4]固氮施氏假单胞菌RpoN蛋白对鞭毛合成的影响[J]. 李耘,刘晓东,李琴,战嵛华,燕永亮,陆伟. 中国农业科技导报. 2017(11)
[5]黄颡鱼“溃疡综合征”病原的分离鉴定及药敏试验[J]. 徐洋,蔺凌云,姚嘉赟,盛鹏程,潘晓艺,尹文林,沈锦玉. 淡水渔业. 2015(05)
[6]维氏气单胞菌鞭毛蛋白flaA的克隆及原核表达[J]. 翟新新,温振才,沈雪飞,孙真,贾生美,张俊辉,王文东,杨振国,卢强. 中国畜牧兽医. 2014(07)
[7]溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统分子伴侣护航蛋白VscO的基因克隆及其生物信息学分析[J]. 庞欢瑛,周泽军,丁燏,黄郁葱,吴灶和,简纪常. 生物技术通报. 2014(06)
[8]罗非鱼维氏气单胞菌的分离鉴定和药敏试验[J]. 黎炯,叶星,卢迈新,邓国成,迟妍妍,黄樟翰. 水生态学杂志. 2011(03)
[9]中华绒螯蟹病原维氏气单胞菌的检验[J]. 房海,陈翠珍,张晓君,巩元芳,葛慕湘. 中国人兽共患病学报. 2008(01)
[10]260株气单胞菌的表型特性与毒素原性研究[J]. 崔树玉,孙启华,李景学,周国清,李爱萍,张志国. 微生物学通报. 1997(04)
博士论文
[1]RpoE在伤寒沙门菌克服环境高渗应激中的基因表达调节机制研究[D]. 杜鸿.江苏大学 2012
硕士论文
[1]维氏气单胞菌胞外产物蛋白分析及hisJ基因功能的初步研究[D]. 张海朋.吉林农业大学 2018
[2]固氮施氏假单胞菌RpoN蛋白调控硝酸盐同化的作用机制[D]. 李耘.中国农业科学院 2016
[3]迟钝爱德华氏菌EIB202 Sigma（54）编码基因rpoN的敲除及功能研究[D]. 王克平.华东理工大学 2012
[4]四川地区斑点叉尾鮰几种重要细菌性疾病病原检测及病原特性研究[D]. 范方玲.四川农业大学 2010
本文编号：3496355
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