小鼠睾丸荧光定量PCR分析的内参基因筛选

发布时间：2021-11-21 20:18

　　旨在筛选出小鼠睾丸组织中最优内参基因,为研究小鼠睾丸发育过程中的目的基因表达提供基础依据.以小鼠作为研究对象,采用Trizol法提取4个不同发育时期（1周龄、3周龄、6周龄、9周龄）睾丸组织总RNA并反转录获得其cDNA.且根据已有报道,选出小鼠常见相对稳定的7种内参基因β-肌动蛋白（β-actin）、肽基异构酶A（PPIA）、酸性核糖体磷酸蛋白（ARBP）、18S核糖体RNA（18S rRNA）、琥珀酸脱氢酶复合黄蛋白亚基A（SDHA）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）和次黄嘌呤磷酸核糖转移酶1（HPRT1）的GenBank登陆序列设计所需荧光定量引物,结合实时荧光定量PCR（RT-qPCR）技术分别验证候选基因引物特异性并构建以睾丸组织为模板各基因的标准曲线,并通过GeNorm程序对各基因稳定性进行分析,筛选出小鼠睾丸中最适内参基因.结果表明,各个时期睾丸组织RNA电泳条带没有出现弥散和拖带的现象;所设计的候选基因引物条带单一没有杂带且RT-qPCR溶解曲线均呈现单一信号峰,并具有良好的线性关系;候选基因稳定性值（M值）进行排序:PPIA=β-actin>ARBP>... 

【文章来源】：西南民族大学学报(自然科学版). 2020,46(05)

【文章页数】：9 页

【部分图文】：

睾丸组织RNA的电泳结果

使用GeNorm程序将某一个内参基因与其他选择的内参基因表达水平的两两比值经对数变换,然后计算出的平均标准差作为基因表达稳定性的平均值(M值).本研究所选7个管家基因PPIA、β-actin、ARBP、HPRT1、SDHA、18S rRNA和GAPDH对应的M值分别为0.513、0.513、0.804、1.154、3.179、4.481、5.021,表达稳定性顺序为PPIA=β-actin>ARBP>HPRT1>SDHA>18S rRNA>GAPDH.如图所示,7种候选内参基因最稳定的是PPIA和β-actin,最不稳定的为GAPDH(图5).图3 小鼠睾丸组织中7个内参基因RT-qPCR溶解曲线

小鼠睾丸组织中7个内参基因RT-qPCR溶解曲线

【参考文献】：
期刊论文
[1]小鼠卵巢组织定量PCR分析中内参基因的筛选[J]. 杨显英,熊显荣,韩杰,黄向月,王艳,阿果约达,李键.  畜牧兽医学报. 2019(02)
[2]乳腺癌细胞（MCF-7）内参基因的选择[J]. 李光超,武小虎,马友记,张勇,赵兴绪.  中国兽医学报. 2017(02)
[3]家兔不同发育阶段和组织中内参基因的稳定性分析[J]. 陈瑞,杨晓农,曾婉秋,文娟.  畜牧兽医学报. 2016(03)



本文编号：3510169