弓背青鳉雌、雄激素受体基因对雌激素响应及雌二醇处理转录组分析
发布时间：2021-11-21 21:53
环境雌激素（Environmental estrogens,EEs）是一种具有雌激素效应,在生物体内模拟雌激素,并通过相应受体介导而对生物体基因转录造成影响的一类化合物。雌激素受体（Estrogen receptor）与雄激素受体（Andorgen receptor）是核受体超家族的成员,介导性激素信号传导,参与性腺发育、成熟等生理过程。弓背青鳉（Oryzias curvinotus）作为湛江本地红树林主要种,具有繁殖力强、世代周期短、广盐性等特点,具有开发为模式生物的潜力。本研究对弓背青鳉进行了RT-qPCR的内参基因筛选;初步探究了弓背青鳉雌、雄激素受体基因表达特征与功能。同时为了评估EEs给生物体带来的潜在危害风险,筛选出合适的EEs监测生物标志物,本研究对雌二醇（E2）处理24 h弓背青鳉仔鱼进行转录组测序,并筛选出显著上调基因,评估其对雌激素处理的响应特性及对双酚A处理的敏感程度。主要结果如下:1、对弓背青鳉进行RT-qPCR内参基因的筛选,通过RefFinder预测,结合geNorm、NormFinder和Bestkeeper分析,结果显示使用eef1...
【文章来源】：广东海洋大学广东省
【文章页数】：88 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
雌激素及其类似物诱导下的Chg与Vtg合成的简图(ChenX.2007)
弓背青鳉雌、雄激素受体基因对雌激素响应及雌二醇处理转录组分析122.2结果2.2.1管家基因引物检验及cDNA和DNA扩增产物比较各候选的管家基因PCR扩增检测结果如图2-1所示，其中，各候选管家基因引物以cDNA为模板所扩增的产物，均比以DNA为模板扩增的产物片段短，这证实了所用的cDNA模板中无基因组DNA污染。与此同时，测序成功的候选内参基因序列信息经与本地转录组预测序列比对，并通过blastn在线软件证实其扩增是特异性的。图2-1不同模版(水、cDNA、DNA)检测不同管家基因特异性引物Fig.2-1Testingofdifferenttemplates(ddH2O,cDNA,DNA)withspecificprimers注：1为DNA；2为水；3为cDNA；M为DL2000DNAMarkerNote:1:DNA;2:water;3:cDNA;M:DL2000DNAMarker2.2.2管家基因标准曲线绘制根据在连续梯度稀释浓度下的cDNA作为RT-qPCR模板所得各管家基因的Ct值，绘制出各管家基因RT-qPCR的扩增标准曲线图，从而计算出扩增曲线的斜率k以及线性相关系数R2，根据公式计算扩增效率E=10-(1/k)-1，结果如图2-2所示，各管家基因的线性相关系数为0.9914至0.9996，扩增效率范围为94.6%至103.4%。2.2.3管家基因表达稳定性分析为了评估10种管家基因的mRNA表达稳定性，以不同组织、不同胚胎发育阶段、E2和BPA处理的cDNA作为模板进行RT-qPCR扩增。如图2-3所示，各
弓背青鳉雌、雄激素受体基因对雌激素响应及雌二醇处理转录组分析14图2-3各系列模板管家基因Ct值比较Fig.2-3Expressionprofilesofcandidatereferencegenes图2-4geNorm分析所有管家基因的平均表达稳定值MFig.2-4Theaverageexpressionstabilityvalue(M)ofallthehousekeepinggenesanalysedbygeNormsoftware
【参考文献】：
期刊论文
[1]弓背青鳉的胚胎发育及自发荧光观察[J]. 张海瑞,王中铎,黄顺楷,汪淳,郭昱嵩,董忠典,刘楚吾. 广东海洋大学学报. 2019(02)
[2]多鳞鱚不同组织荧光定量PCR内参基因筛选[J]. 张宁,杜文文,王中铎,黄洋,杜涛,董忠典. 广东海洋大学学报. 2018(05)
[3]海水青鳉雌激素受体基因的克隆、组织表达特性及环境雌激素EE2对其表达的影响[J]. 张民,安哲,彭会. 大连海洋大学学报. 2018(02)
[4]抗肝纤维化药物研发进展[J]. 张文东,王瑞范,吴会敏,杨慧,王国成. 药学学报. 2018(05)
[5]模式生物海洋青鳉鱼的视觉结构与功能发育[J]. 陈剑明,刘肖岑,徐永健. 中国实验动物学报. 2018(02)
[6]中国青鳉属鱼类新纪录:鳍斑青鳉[J]. 吴伟名,李建中. 动物学杂志. 2017(05)
[7]广东淡水鱼类弓背青鳉分类形态性状再描述[J]. 张方方,姜昊辰,金锦锦,仇玉萍,陈国柱. 四川动物. 2017(05)
[8]转录组测序技术研究进展[J]. 洪奇阳,毕行建,王大宁,李子真,俞海,夏宁邵,李少伟. 中国生化药物杂志. 2017(06)
[9]双酚A的内分泌干扰效应研究进展[J]. 吴皓,孙东,蔡卓平,刁盼盼,石健,陈琪,段舜山. 生态科学. 2017(03)
[10]兴国红鲤ER基因克隆表达及EE2暴露对肝中ER表达的影响[J]. 宋明月,单喜双,陈细华,岳华梅,叶欢,杨晓鸽,李创举. 水生生物学报. 2017(01)
博士论文
[1]双酚A （BPA）对稀有鮈鲫精子发生的影响及分子机制研究[D]. 张莹莹.西北农林科技大学 2017
[2]典型红树林湿地中多环芳烃的含量、来源和迁移研究[D]. 张军.厦门大学 2006
硕士论文
[1]雷州半岛红树林区仔稚幼鱼多样性及弓背青鳉对壬基酚的响应[D]. 廖健.广东海洋大学 2017
[2]七彩神仙鱼（Symphysodon haraldi）性腺转录组分析及vasa基因的时空表达[D]. 林睿涓.上海海洋大学 2017
[3]兴国红鲤ERs、AR基因的克隆表达及EE2、MT暴露对幼鱼肝中ERs、AR基因表达的影响[D]. 宋明月.上海海洋大学 2016
[4]金钱鱼雄激素受体的克隆及其表达模式的研究[D]. 戴明莉.广东海洋大学 2015
[5]17β-雌二醇对斑马鱼的毒性研究[D]. 李国超.中国农业科学院 2015
[6]稀有鮈鲫ER基因的克隆及内分泌干扰物对其表达的影响[D]. 王厚鹏.西北农林科技大学 2012
[7]大黄鱼雌激素受体与雄激素受体基因的克隆与表达分析[D]. 蒲鲁鲁.集美大学 2011
[8]南方鲇雄激素受体（AR）全长cDNA的克隆及分析[D]. 黄宝锋.西南大学 2008
[9]雌激素受体在小鼠早期胚胎发育中的表达[D]. 李丹丹.东北农业大学 2008
[10]唐鱼雌激素受体cDNA克隆及表达分析[D]. 管昕.华南师范大学 2007
本文编号：3510317
【文章来源】：广东海洋大学广东省
【文章页数】：88 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
雌激素及其类似物诱导下的Chg与Vtg合成的简图(ChenX.2007)
弓背青鳉雌、雄激素受体基因对雌激素响应及雌二醇处理转录组分析122.2结果2.2.1管家基因引物检验及cDNA和DNA扩增产物比较各候选的管家基因PCR扩增检测结果如图2-1所示，其中，各候选管家基因引物以cDNA为模板所扩增的产物，均比以DNA为模板扩增的产物片段短，这证实了所用的cDNA模板中无基因组DNA污染。与此同时，测序成功的候选内参基因序列信息经与本地转录组预测序列比对，并通过blastn在线软件证实其扩增是特异性的。图2-1不同模版(水、cDNA、DNA)检测不同管家基因特异性引物Fig.2-1Testingofdifferenttemplates(ddH2O,cDNA,DNA)withspecificprimers注：1为DNA；2为水；3为cDNA；M为DL2000DNAMarkerNote:1:DNA;2:water;3:cDNA;M:DL2000DNAMarker2.2.2管家基因标准曲线绘制根据在连续梯度稀释浓度下的cDNA作为RT-qPCR模板所得各管家基因的Ct值，绘制出各管家基因RT-qPCR的扩增标准曲线图，从而计算出扩增曲线的斜率k以及线性相关系数R2，根据公式计算扩增效率E=10-(1/k)-1，结果如图2-2所示，各管家基因的线性相关系数为0.9914至0.9996，扩增效率范围为94.6%至103.4%。2.2.3管家基因表达稳定性分析为了评估10种管家基因的mRNA表达稳定性，以不同组织、不同胚胎发育阶段、E2和BPA处理的cDNA作为模板进行RT-qPCR扩增。如图2-3所示，各
弓背青鳉雌、雄激素受体基因对雌激素响应及雌二醇处理转录组分析14图2-3各系列模板管家基因Ct值比较Fig.2-3Expressionprofilesofcandidatereferencegenes图2-4geNorm分析所有管家基因的平均表达稳定值MFig.2-4Theaverageexpressionstabilityvalue(M)ofallthehousekeepinggenesanalysedbygeNormsoftware
【参考文献】：
期刊论文
[1]弓背青鳉的胚胎发育及自发荧光观察[J]. 张海瑞,王中铎,黄顺楷,汪淳,郭昱嵩,董忠典,刘楚吾. 广东海洋大学学报. 2019(02)
[2]多鳞鱚不同组织荧光定量PCR内参基因筛选[J]. 张宁,杜文文,王中铎,黄洋,杜涛,董忠典. 广东海洋大学学报. 2018(05)
[3]海水青鳉雌激素受体基因的克隆、组织表达特性及环境雌激素EE2对其表达的影响[J]. 张民,安哲,彭会. 大连海洋大学学报. 2018(02)
[4]抗肝纤维化药物研发进展[J]. 张文东,王瑞范,吴会敏,杨慧,王国成. 药学学报. 2018(05)
[5]模式生物海洋青鳉鱼的视觉结构与功能发育[J]. 陈剑明,刘肖岑,徐永健. 中国实验动物学报. 2018(02)
[6]中国青鳉属鱼类新纪录:鳍斑青鳉[J]. 吴伟名,李建中. 动物学杂志. 2017(05)
[7]广东淡水鱼类弓背青鳉分类形态性状再描述[J]. 张方方,姜昊辰,金锦锦,仇玉萍,陈国柱. 四川动物. 2017(05)
[8]转录组测序技术研究进展[J]. 洪奇阳,毕行建,王大宁,李子真,俞海,夏宁邵,李少伟. 中国生化药物杂志. 2017(06)
[9]双酚A的内分泌干扰效应研究进展[J]. 吴皓,孙东,蔡卓平,刁盼盼,石健,陈琪,段舜山. 生态科学. 2017(03)
[10]兴国红鲤ER基因克隆表达及EE2暴露对肝中ER表达的影响[J]. 宋明月,单喜双,陈细华,岳华梅,叶欢,杨晓鸽,李创举. 水生生物学报. 2017(01)
博士论文
[1]双酚A （BPA）对稀有鮈鲫精子发生的影响及分子机制研究[D]. 张莹莹.西北农林科技大学 2017
[2]典型红树林湿地中多环芳烃的含量、来源和迁移研究[D]. 张军.厦门大学 2006
硕士论文
[1]雷州半岛红树林区仔稚幼鱼多样性及弓背青鳉对壬基酚的响应[D]. 廖健.广东海洋大学 2017
[2]七彩神仙鱼（Symphysodon haraldi）性腺转录组分析及vasa基因的时空表达[D]. 林睿涓.上海海洋大学 2017
[3]兴国红鲤ERs、AR基因的克隆表达及EE2、MT暴露对幼鱼肝中ERs、AR基因表达的影响[D]. 宋明月.上海海洋大学 2016
[4]金钱鱼雄激素受体的克隆及其表达模式的研究[D]. 戴明莉.广东海洋大学 2015
[5]17β-雌二醇对斑马鱼的毒性研究[D]. 李国超.中国农业科学院 2015
[6]稀有鮈鲫ER基因的克隆及内分泌干扰物对其表达的影响[D]. 王厚鹏.西北农林科技大学 2012
[7]大黄鱼雌激素受体与雄激素受体基因的克隆与表达分析[D]. 蒲鲁鲁.集美大学 2011
[8]南方鲇雄激素受体（AR）全长cDNA的克隆及分析[D]. 黄宝锋.西南大学 2008
[9]雌激素受体在小鼠早期胚胎发育中的表达[D]. 李丹丹.东北农业大学 2008
[10]唐鱼雌激素受体cDNA克隆及表达分析[D]. 管昕.华南师范大学 2007
本文编号：3510317
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3510317.html
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