大麦无筛选标记遗传转化体系的建立及Nud基因的编辑

发布时间：2021-11-23 05:37

　　大麦是世界第四大禾谷类作物,因其抗逆性强、适应性广而被广泛种植,其基因组较小,是麦类遗传研究的模式植物之一。目前大麦的转基因研究较少,有严重的基因型依赖性,而且中国还没有安全型转基因大麦植株的报道,因此建立商业化推广大麦品种的无筛选标记遗传转化体系,对于大麦的遗传改良和基因功能研究具有重要意义。本研究建立了商业化大麦品种Vlamingh的农杆菌转化体系,成功将双T-DNA载体p WMB123转入大麦中,获得了稳定遗传的转基因植株。并且通过后代遗传分离成功获得了无筛选标记转基因植株。同时利用CRISPR/Cas9系统对大麦皮裸基因Hv Nud及其在小麦中的同源基因Ta Nud进行了定点突变,获得了基因编辑突变体。主要研究结果如下:1、对大麦品种Vlamingh的培养基成分及培养步骤进行了摸索优化:发现在愈伤组织分化阶段,培养基中添加1.0 mg/L KT、0.5 mg/L 6-BA和0.05 mg/L NAA明显促进愈伤组织分化;在转基因植株生根阶段,发现采用添加1.0 mg/L的IBA的SM1培养基（无其他生长素）的生根效果最佳;培养基中添加2.5 mg/L Cu SO₄

【文章来源】：长江大学湖北省

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

大麦愈伤组织在不同培养基上的分化情况

18AB图3CuSO4对转基因大麦小植株白化现象的影响A：不添加CuSO4；B：添加CuSO4Fig.3TheeffectofcoppersulfateonthealbnismoftransgenicbarleyplantsA:1/2MSmediumwithoutcoppersulfate;B:1/2MSmediumwith2.5mg/Lcoppersulfate虽然一步成苗的大麦植株在添加IBA的1/2MS培养基上生根效果很好，但转基因大麦植株在该培养基上生根效果并不理想。因此，又探索了添加IBA的没有其他生长素的SM1培养基、DM培养基和BRM培养基的生根效果。结果表明，大麦转基因植株在仅添加IBA无其他生长素的DM和BRM培养基上虽然生长状态较好，但是仍然很难生根，而在添加IBA的无其他生长素的SM1培养基上的生根效果较好。

19SR15SR14SR13SR12SR11SR10SR9SR1SR2SR3SR4SR5SR6SR7SR8图4大麦再生植株在不同激素配比培养基上的生根情况Fig.4RootingstatusoftransgenicBarleyplantletson15mediawithdifferenthormoneratios


本文编号：3513237