草鱼IL-23R基因的克隆及其在肠道炎症中的作用

发布时间：2021-11-24 09:54

　　目的:白细胞介素-23（interleukin-23,IL-23）是IL-12分子家族中的促炎细胞因子,在炎性和自身免疫性疾病中起到重要的病理作用。IL-23R（interleukin-23 receptor）是IL-23的特异受体,可特异性传导IL-23刺激所产生的信号,在固有免疫与适应性免疫之间起到重要的调节作用。草鱼是我国最重要的淡水养殖品种,但其易遭受细菌、病毒和寄生虫等病原的感染,引发炎症乃至死亡。本研究旨在克隆草鱼IL-23R基因,分析其基因结构,明确其在草鱼生理及病理条件下基因表达模式的变化,揭示该基因在草鱼肠道炎症进程中的表达特征及作用。方法:（1）运用RACE技术克隆草鱼IL-23R全长cDNA,基于表达载体pET-28a（+）和大肠杆菌原核表达系统表达重组IL-23R蛋白,利用重组蛋白带有6个组氨酸（6 × His）标签的特性,使用Ni-NTA螯合亲和层析法纯化变性后的目的蛋白,然后将其梯度透析复性,最终获得具有生物活性的重组草鱼IL-23R蛋白（rgcIL-23R）。（2）以割胶纯化的rgcIL-23R为免疫原,制备抗草鱼IL-23R多克隆抗体（rgcIL-23R... 

【文章来源】：苏州大学江苏省 211工程院校

【文章页数】：126 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－１草鱼／Ｌ－２Ｗ？部分序列扩增产物的电泳分析??；主：Ｍ，ＤＮＡ?分子量标准（ＴａＫａＲａ?公司?１００?ｂｐ?ＤＮＡ?ｌａｄｄｅｒ）??

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第二章草鱼丨Ｌ－２３Ｒ活性蛋白及其多克隆抗体的制备?草鱼丨Ｌ－２３Ｒ基因的克隆及其在肠道炎症中的作用??ｋＤａ?Ｍ?１?２?３?４?５?６??１?（＼ｒ＼?—??，??１ＵＵ？？浐一＊?？Ｖ；??ａ?ｍ??３５?．，，娜?｜｜Ｍ（??２５?“??图２－１?ｒｇｃＩＬ－２３Ｒ蛋白的可溶性分析??注：ＭＭａｒｋｅｒ?（ｋＤａ）?；?ｌ．ｒｇｃＩＬ－２３Ｒ诱导前菌体总蛋白；２．?ｒｇｃＩＬ－２３Ｒ诱导后菌体总蛋白：３．??超声后上清；４．超声后沉淀；５．?ＢＬ２１诱导后菌体总蛋白；６．ｐＥＴ－２８ａ（＋）／ＢＬ２１诱导后菌体总??蛋白。??Ｆｉｇ．?２－１?Ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｒｇｃＩＬ－２３Ｒ?ｐｒｏｔｅｉｎ??Ｎｏｔｅｓ：?Ｍ，?Ｐｒｏｔｅｉｎ?ｍａｒｋｅｒ?（ｋＤａ）；?Ｌａｎｅ?１，?ｗｈｏｌｅ?ｃｅｌｌ?ｌｙｓａｔｅ?ｏｆ?ｕｎｉｎｄｕｃｅｄ?ｐＥＴ－２８ａ（＋）－ＩＬ－２３Ｒ／ＢＬ２１；??Ｌａｎｅ?２，?ｗｈｏｌｅ?ｃｅｌｌ?ｌｙｓａｔｅ?ｏｆ?ｉｎｄｕｃｅｄ?ｐＥＴ－２８ａ（＋）－ＩＬ－２３ＲｙＢＬ２１；?Ｌａｎｅ?３，?Ｓｕｐｅｒｎａｔｅ?ａｆｔｅｒ?ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ??ｔｒｅａｔｍｅｎｔ；?Ｌａｎｅ?４．?Ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｅ?ａｆｔｅｒ?ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ；?Ｌａｎｅ?５，?ｗｈｏｌｅ?ｃｅｌｌ?ｌｙｓａｔｅ?ｏｆ?ｉｎｄｕｃｅｄ?ＢＬ２１：??Ｌａｎｅ?６．?ｗｈｏｌｅ?ｃｅｌｌ?ｌｙｓａｔｅ?ｏｆ?ｉｎｄｕｃｅｄ?ｐＥＴ－２８ａ（＋）／ＢＬ２１．??２．２Ｎｉ－ＮＴＡ纯化后ｒｇｃｌＬ－２３Ｒ的浓度、纯度检测及鉴定??１?）纯度检测：如图２－２所

【参考文献】：
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本文编号：3515741