结核分枝杆菌H37Ra转座突变库的建立及生物膜相关基因的筛选与分析
发布时间：2021-11-25 11:21
结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）是结核病最主要的致病菌,机体感染后,经呼吸道、消化道在体内扩散,侵犯肺、肾及神经等其他组织器官,引发活动性结核病,具有较强的传染性和致病性;或者,在体内长期潜伏形成潜伏性结核感染（latent tuberculosis infection,LTBI）。每年结核病新发人数超过千万,而因结核病死亡的人数约在140-160万之间,覆盖整个年龄层和所有地区,引起国内外的高度关注。近年来,多种抗生素药物的使用,人口的全球性流动和HIV的流行,给结核病诊断与治疗带来新的危机。目前,全球有许多实验室正在致力于从基因组上全面解析结核分枝杆菌的发病机制及在体内的存活规律,为诊断和治疗结核病提供新的思路和技术手段。本研究使用结核分枝杆菌H37Ra构建转座突变库,从转座突变库中筛选生物膜突变体,定位相关基因,并分析生物膜相关基因,为本实验室结核分枝杆菌分子机制的深入研究奠定基础,同时提供一种有效方便的筛选结核分枝杆菌生物膜突变体的模型和多个宝贵的生物膜突变体材料,有助于了解结核分枝杆菌生物膜形成的遗传机制。1结核分枝杆菌H37Ra转...
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２特异性转导??Ｆｉｇ?２?Ｓｐｅｃｉａｌｉｚｅｄ?ｔｒａｎｓｄｕｃｉｎｇ??
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【参考文献】：
期刊论文
[1]Advances in the development of molecular genetic tools for Mycobacterium tuberculosis[J]. Chiranjibi Chhotaray,Yaoju Tan,Julius Mugweru,Md Mahmudul Islam,H.M.Adnan Hameed,Shuai Wang,Zhili Lu,Changwei Wang,Xinjie Li,Shouyong Tan,Jianxiong Liu,Tianyu Zhang. Journal of Genetics and Genomics. 2018(06)
[2]海分枝杆菌mas基因的功能研究[J]. 朱江化,于佳,高谦. 微生物与感染. 2007(03)
硕士论文
[1]结核分枝杆菌生物膜形成相关基因的筛选与鉴定[D]. 刘霞.宁夏医科大学 2013
[2]耻垢分枝杆菌突变菌株库的建立及耐卷曲霉素突变株的筛选与性质研究[D]. 刘雪梅.西南大学 2008
本文编号：3518036
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２特异性转导??Ｆｉｇ?２?Ｓｐｅｃｉａｌｉｚｅｄ?ｔｒａｎｓｄｕｃｉｎｇ??
?第一章结核分枝杆菌Ｈ３７Ｒａ转座突变库的建立???得效价较高的噬菌体原液，在培养后能够形成大量噬菌斑（图卜ｌｂ）。??／?＼??ａ．?ｆｅｗ?ｐｌａｑｕｅｓ?ｂ．?ｍａｎｙ?ｐｌａｑｕｅｓ??图１－１噬菌体的扩增??Ｆｉｇ?１－１?Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｐｈａｇｅｓ??３．２噬菌体的筛选??调整噬菌体稀释度，铺板培养后形成数量合适且明显的噬菌斑，一式两份，将噬菌??体分别接种在两块仅含耻垢分枝杆菌的双层琼脂平板上，做好标记，一块置于３７°Ｃ恒??温培养箱，另一块置于３０°Ｃ恒温培养箱，培养后观察结果：３０°Ｃ培养的所有噬菌体均??形成圆亮透明的噬菌斑，３７°Ｃ培养的噬菌体有部分可以形成模糊细小的噬菌斑，多次??筛选，直至３７°Ｃ完全不形成噬菌斑（图１－２）。最终筛选得到温敏特性稳定的??（ＤＭｙｃｏＭａｒＴ７噬菌体，该噬菌体能够在３０°Ｃ生长，而３７°Ｃ完全不生长，通过Ｈｉｍａｒ转??座子随机插入Ｈ３７Ｒａ基因组，产生大量转座突变体，避免后期鉴定由于３７°Ｃ培养温度??下噬菌体存活而产生的假阳性。??；?？?？?＿＿＿＿＿．?ｕ?＿＿０?＿＿Ｃ?—１??上丄上！１?＿＿＿．??Ｃｕｌｔｕｒｅｄ?ａｔ?３０°Ｃ?Ｃｕｌｔｕｒｅｄ?ａｔ?３７°Ｃ??图１－２温敏型噬菌体的筛选??Ｆｉｇ?１－２?Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ－ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ?ｐｈａｇｅｓ??３．３温敏型噬菌体的富集??筛选得到稳定的温敏型噬菌体，刮取噬菌斑，制备得到少量原液。经过铺板扩增培??１７??
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【参考文献】：
期刊论文
[1]Advances in the development of molecular genetic tools for Mycobacterium tuberculosis[J]. Chiranjibi Chhotaray,Yaoju Tan,Julius Mugweru,Md Mahmudul Islam,H.M.Adnan Hameed,Shuai Wang,Zhili Lu,Changwei Wang,Xinjie Li,Shouyong Tan,Jianxiong Liu,Tianyu Zhang. Journal of Genetics and Genomics. 2018(06)
[2]海分枝杆菌mas基因的功能研究[J]. 朱江化,于佳,高谦. 微生物与感染. 2007(03)
硕士论文
[1]结核分枝杆菌生物膜形成相关基因的筛选与鉴定[D]. 刘霞.宁夏医科大学 2013
[2]耻垢分枝杆菌突变菌株库的建立及耐卷曲霉素突变株的筛选与性质研究[D]. 刘雪梅.西南大学 2008
本文编号：3518036
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