番茄碱性/中性转化酶SlCIN3基因功能研究
发布时间：2021-11-25 22:15
碱性/中性转化酶也称胞质转化酶（alkaline/neutral invertase,cytoplasmic invertases,CINs）,是植物中存在的专性分解蔗糖的蛋白家族,在调控植物器官发育和产品品质形成中发挥重要作用。本研究利用生物信息学分析、原核表达、亚细胞定位、RNA干扰等方法来探究番茄（Solanum lycopersicum）中碱性/中性转化酶SlCIN3基因的功能。主要研究结果如下:1)通过对番茄果实成熟时期的SlCINs基因家族成员的表达分析发现,番茄中的SlCINs基因在果实转色期和红熟期的表达较高,其中SlCIN3基因的表达量最高,其在转色期和红熟期的表达与绿熟期相比增加了4-5倍,推测其可能是果实成熟后期己糖积累过程中的功能基因之一。利用NaCl、PEG和ABA对番茄幼苗进行处理后,分析SlCIN3基因的表达模式发现,SlCIN3的表达受高盐、渗透胁迫以及ABA的诱导。2)对SlCIN3进行生物信息学分析,我们发现它编码一个等电点为8.18具有653个氨基酸残基的蛋白质,其分子量是74.46kDa。通过构建系统进化树发现SlCIN3被分类为α亚族,亚细胞定...
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
线粒体A/N-Invs与mtHXK作用模式图
沈阳农业大学硕士学位论文T(http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)分析确保引物a 公司合成。选择合适的内参引物 Actin-F 和 Actin-R(CFX96，美国 Bio-Rad)进行 qRT-PCR 反应。采用 SYt Tip Green qPCR SuperMix，TIANGEN)，反应体系如据用 2-△△Ct方法进行分析。表 2-4 qRT-PCR 反应体系Table 2-4 qRT-PCR reaction system组成成分Composition使Volum2×SYBG Green Mix 9cDNA 2正向引物 F 1反向引物 R 1RNase-Free ddH2O 补足到
用元件的分析(Patrice et al., 2002)。将获得的结果，利用 Exc载体构建目的片段基因组数据库(http:solgenomics.net/)中 SlCIN3 的 cDNA 序计特异扩增引物，含有 NcoI 酶切位点的 pET32a-SlCIN3-F 和2a-SlCIN3-R(附录 2)，以 cDNA 为模板，利用 PCR 扩增技术如表 2-5 所示。PCR 反应程序如图 2-2 所示。表 2-5 PCR 扩增反应体系Table 2-5 PCR amplification reaction system组成成分Composition使用量Volume of use高保真 DNA 聚合酶 10 μL正向引物 F 1 μL反向引物 R 1 μLcDNA 2 μLRNase-Free ddH2O 补足到 20 μL
【参考文献】：
期刊论文
[1]蔗糖转化酶家族基因进化、表达及对草莓果实糖分积累的影响[J]. 张玲,王延秀,高清华,段可. 园艺学报. 2017(06)
[2]番茄HSP20基因家族的全基因组鉴定、系统进化及表达分析[J]. 张宁,姜晶,史洁玮. 沈阳农业大学学报. 2017(02)
[3]木薯碱性/中性转化酶MeNINV1基因启动子的克隆及激素应答表达分析[J]. 王运林,姚远,耿梦婷,孙冲,尚璐,李瑞梅,符少萍,胡新文,郭建春. 分子植物育种. 2017(02)
[4]茶树中性/碱性转化酶基因CsINV10的克隆与表达分析[J]. 钱文俊,岳川,曹红利,郝心愿,王璐,王玉春,黄玉婷,王博,王新超,肖斌,杨亚军. 作物学报. 2016(03)
[5]甘蔗中性/碱性转化酶基因SoNIN1的克隆和表达分析[J]. 牛俊奇,王爱勤,黄静丽,杨丽涛,李杨瑞. 作物学报. 2014(02)
[6]番茄果实生长发育过程中糖的代谢[J]. 刘以前,沈火林,石正强. 华北农学报. 2006(03)
[7]番茄果实发育过程中糖的变化与相关酶活性的关系[J]. 齐红岩,李天来,张洁,刘海涛. 园艺学报. 2006(02)
[8]植物转化酶的种类﹑特性与功能[J]. 潘秋红,张大鹏. 植物生理学通讯. 2004(03)
硕士论文
[1]Sly-miR168α调控番茄钾养分吸收和利用的功能验证[D]. 刘杨.沈阳农业大学 2018
[2]SlSWEET12c和SlSWEET14在番茄果实成熟期糖转运与积累中的作用[D]. 程杰.沈阳农业大学 2018
[3]木薯碱性/中性转化酶nINV1基因功能的初步研究[D]. 孙冲.黑龙江八一农垦大学 2017
本文编号：3518893
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
线粒体A/N-Invs与mtHXK作用模式图
沈阳农业大学硕士学位论文T(http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)分析确保引物a 公司合成。选择合适的内参引物 Actin-F 和 Actin-R(CFX96，美国 Bio-Rad)进行 qRT-PCR 反应。采用 SYt Tip Green qPCR SuperMix，TIANGEN)，反应体系如据用 2-△△Ct方法进行分析。表 2-4 qRT-PCR 反应体系Table 2-4 qRT-PCR reaction system组成成分Composition使Volum2×SYBG Green Mix 9cDNA 2正向引物 F 1反向引物 R 1RNase-Free ddH2O 补足到
用元件的分析(Patrice et al., 2002)。将获得的结果，利用 Exc载体构建目的片段基因组数据库(http:solgenomics.net/)中 SlCIN3 的 cDNA 序计特异扩增引物，含有 NcoI 酶切位点的 pET32a-SlCIN3-F 和2a-SlCIN3-R(附录 2)，以 cDNA 为模板，利用 PCR 扩增技术如表 2-5 所示。PCR 反应程序如图 2-2 所示。表 2-5 PCR 扩增反应体系Table 2-5 PCR amplification reaction system组成成分Composition使用量Volume of use高保真 DNA 聚合酶 10 μL正向引物 F 1 μL反向引物 R 1 μLcDNA 2 μLRNase-Free ddH2O 补足到 20 μL
【参考文献】：
期刊论文
[1]蔗糖转化酶家族基因进化、表达及对草莓果实糖分积累的影响[J]. 张玲,王延秀,高清华,段可. 园艺学报. 2017(06)
[2]番茄HSP20基因家族的全基因组鉴定、系统进化及表达分析[J]. 张宁,姜晶,史洁玮. 沈阳农业大学学报. 2017(02)
[3]木薯碱性/中性转化酶MeNINV1基因启动子的克隆及激素应答表达分析[J]. 王运林,姚远,耿梦婷,孙冲,尚璐,李瑞梅,符少萍,胡新文,郭建春. 分子植物育种. 2017(02)
[4]茶树中性/碱性转化酶基因CsINV10的克隆与表达分析[J]. 钱文俊,岳川,曹红利,郝心愿,王璐,王玉春,黄玉婷,王博,王新超,肖斌,杨亚军. 作物学报. 2016(03)
[5]甘蔗中性/碱性转化酶基因SoNIN1的克隆和表达分析[J]. 牛俊奇,王爱勤,黄静丽,杨丽涛,李杨瑞. 作物学报. 2014(02)
[6]番茄果实生长发育过程中糖的代谢[J]. 刘以前,沈火林,石正强. 华北农学报. 2006(03)
[7]番茄果实发育过程中糖的变化与相关酶活性的关系[J]. 齐红岩,李天来,张洁,刘海涛. 园艺学报. 2006(02)
[8]植物转化酶的种类﹑特性与功能[J]. 潘秋红,张大鹏. 植物生理学通讯. 2004(03)
硕士论文
[1]Sly-miR168α调控番茄钾养分吸收和利用的功能验证[D]. 刘杨.沈阳农业大学 2018
[2]SlSWEET12c和SlSWEET14在番茄果实成熟期糖转运与积累中的作用[D]. 程杰.沈阳农业大学 2018
[3]木薯碱性/中性转化酶nINV1基因功能的初步研究[D]. 孙冲.黑龙江八一农垦大学 2017
本文编号：3518893
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3518893.html
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