沉默CPNE1、KCTD14、FUNDC2基因对MDA-MB-231细胞迁移及侵袭的影响

发布时间：2024-06-30 19:07

　　目的筛选与乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移相关的目的基因,并探究沉默目的基因对MDA-MB-231细胞侵袭的影响,为寻求三阴性乳腺癌的治疗靶点提出新的思路及切入点。方法1.首先针对20个待检基因各设计3个RNA沉默靶点,将携带不同沉默靶点的3个质粒以单独及等比例混合两种方式进行慢病毒包装,感染MDA-MB-231细胞,分别称为shRNA1、shRNA2、shRNA3以及shRNA。本实验同时设置阴性对照组(NC组)。2.利用高内涵筛选划痕实验,通过Celigo系统收集细胞迁移图像并进行数据分析,比较各组细胞的划痕愈伤能力。从20个待检基因之中挑选出与细胞迁移有关的基因,称为目的基因。3.通过蛋白质免疫印迹法(western blot,WB)对目的基因的3个shRNA进行蛋白表达情况的测定,选出沉默效率最好的一组继续后续实验。4.应用Transwell体外侵袭实验,检验目的基因的下调对乳腺癌细胞侵袭能力的影响。5.采用WB方法,检测目的基因沉默后乳腺癌细胞中上皮-间充质转化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白的表达情况,从而进一步...

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【部分图文】：

图1基因沉默对MDA-MB-231细胞迁移能力的影响

划痕实验统计图，各组31细胞24h迁移面积变化(NC/实验组)；B.HCS划痕实验代表图，NC及目的基移图。目的基因后CPNE1、KCTD14、FUNDC2蛋白表达较显减少证目的基因的RNA沉默效率，并从3个shRNA中选取沉默效果最好们利用蛋白质免....

图2目的基因沉默对CPNE1、KCTD14、FUNDC2蛋白表达的影响

17图2目的基因沉默对CPNE1、KCTD14、FUNDC2蛋白表达的影响注：Westernblot蛋白电泳图，NC组及目的基因沉默组中CPNE1蛋白（图A）、KCTD14蛋白（图B）、FUNDC2蛋白（图C）表达情况，以β-actin为内参。4.3....

图3CPNE1、KCTD14、FUNDC2低表达对乳腺癌细胞侵袭能力影响

图3CPNE1、KCTD14、FUNDC2低表达对乳腺癌细胞侵袭能力影响注：显微镜下NC组及shCPNE1组（图A）、shKCTD14组（图B）、shFUNDC2组（图侵袭细胞代表图片（上），侵袭数目统计图（下）。代表图片放大倍数100X，标尺100μ....

本文编号：3998948