丹东蒲公英NRAMP基因克隆及功能鉴定

发布时间：2021-11-27 13:12

　　丹东蒲公英（Taraxacum.antungense Kitag.）为菊科（Compositae）蒲公英属（Taraxacum F.H.Wigg.）多年生草本植物,20世纪60年代有学者提出蒲公英对重金属的富集作用在改良土壤方面有优势潜力（Mossop et al,2000）。为了探究蒲公英可以大量吸附重金属的原因和在吸附过程中相关的分子机理,本试验在丹东蒲公英转录组测序基础上,在NCBI数据库用Blast比对筛选出1条NRAMP基因序列,通过克隆得到Ta NRAMP基因,并运用软件进行生物信息学分析。再运用实时荧光定量PCR手段确定在Cd胁迫下Ta NRAMP基因的表达量变化。最后构建了PRI101-Ta NRAMP过表达载体,并通过农杆菌介导的方式转到丹东蒲公英中,来最终验证NRAMP基因的功能。试验结果如下:1.在丹东蒲公英中成功克隆到NRAMP基因,长1647 bp,编码548个氨基酸。Ta NRAMP氨基酸序列的保守结构域与拟南芥At NRAMP蛋白的相同,系统发育树结果显示与其亲缘关系最接近的是菊科植物向日葵;二级结构预测结果表明该蛋白由39.42%ɑ-螺旋,19.16%β... 

【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

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16 C 连接 2 小时。表 4 pMD19-T-TaNRAMP 连接反应体系Table 4 Ligation Reaction System of pMD19-T vector组分Components体积（μl）Volume (μl)TaNRAMP 基因 4.5pMD19-T Vector 0.5Solution I 5Total 10转化具体试验步骤如下：（1）将感受态细胞与连接产物混匀；（2）冰浴 30min，42 C 热激 90s，冰浴 2min；（3）加入 200μlLB 液体培养基， 200rpm，37 C 培养 1 小时；（4）取 200μl 菌液均匀涂布在 Amp+培养基上，倒置培养（37 C、12h）。

TaNRAMP 基因的琼脂糖凝胶电rophoresis of the PCR Product oTaNRAMP 基因 2.Marker DL2 TaNRAMP gene 2.Marker DL2MP 的菌液 PCR 鉴定结果所示，PCR 结果显示用 M带，说明 TaNRAMP 基因大肠杆菌中。

【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
[1]超积累植物东南景天Cd耐性和积累的分子机制[D]. 张杰.浙江大学 2015



本文编号：3522360