黄瓜有限生长调控基因CsCML25的启动子克隆及功能分析

发布时间：2021-12-29 22:42

　　[目的]本文旨在通过对黄瓜有限生长调控基因CsCML25启动子功能的研究,揭示该基因在黄瓜有限生长过程中的转录调控机制。[方法]以黄瓜自交系材料CCMC的叶片DNA为模板,克隆CsCML25上游的全长启动子序列,并对其顺式调控元件进行分析;构建CsCML25基因过表达载体以及CsCML25启动子驱动GFP报告基因的表达载体,通过农杆菌介导遗传转化法将其转化拟南芥后,观察过表达植株表型并利用荧光显微镜观察GFP的表达规律;采用RT-qPCR分析该CsCML25启动子驱动的GFP报告基因在IAA和6-BA处理后以及在调控拟南芥有限生长基因TFL1影响下的表达变化。[结果]CsCML25启动子全长2 979 bp,包括4个MYB转录因子结合位点、1个WUS结合位点以及多个细胞分裂素、生长素和光响应元件。过量表达CsCML25基因能够造成拟南芥顶端花融合现象,形成与拟南芥突变体tfl1-13相似的有限生长表型。CsCML25启动子驱动GFP在茎尖分生组织、叶原基、花原基以及花瓣等组织部位表达。RT-qPCR结果表明:IAA和6-BA处理能够显著影响CsCML25启动子的转录激活功能;拟南芥有限... 

【文章来源】：南京农业大学学报. 2020,43(04)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

CsCML25启动子在黄瓜基因组上的位置

CsCML25启动子克隆

先将构建的PCsCML25-GFP重组质粒转化农杆菌GV3101中,再将含35S-CsCML25和PCsCML25-GFP的质粒分别转入野生型拟南芥(Col)并收获T0代种子,卡那霉素(50 mg·L-1)筛选后,获得PCsCML25-GFP转基因抗性植株5株及pLP-35S-CsCML25转基因抗性植株2株。提取各单株拟南芥基因组DNA,分别扩增出基因启动子内部特异性条带以及基因表达载体的特异性条带(图3)。采集阳性苗和未转化拟南芥的茎尖进行GUS组织化学染色,结果显示(图4)阴性对照组无任何蓝色斑点出现,过表达转化CsCML25和PCsCML25-GFP的阳性转基因植株均在茎尖检测到了GUS基因的表达,表明CsCML25基因及其启动子已转入野生型拟南芥。

【参考文献】：
期刊论文
[1]黄瓜microRNA171的克隆与功能分析[J]. 朱早兵,虞夏清,翟于菲,王盼乔,赵勤政,李季,娄群峰,陈劲枫.  园艺学报. 2019(05)
[2]过表达钙调素类似蛋白基因CML25-like诱导黄瓜单性结实的研究[J]. 刘嘉斐,张璐,孟永娇,段莉莉,罗雨薇,李季,陈劲枫.  南京农业大学学报. 2019(03)
[3]利用永久群体在不同环境下定位黄瓜株高QTL[J]. 苗晗,顾兴芳,张圣平,张忠华,黄三文,王烨.  中国农业科学. 2012(22)
[4]水稻干旱诱导型启动子Oshox24P的分离与鉴定[J]. 杨梅,熊立仲.  华中农业大学学报. 2011(05)
[5]黄瓜冬季栽培花打顶现象分析及防治措施[J]. 孙小镭.  山东农业科学. 1997(01)

博士论文
[1]黄瓜“花打顶”形态、解剖、细胞学特征及相关基因的分离与鉴定[D]. 李志英.山东农业大学 2003

硕士论文
[1]日光温室黄瓜“花打顶”形成机理的研究[D]. 郑昭英.山东农业大学 2003



本文编号：3556978