HBV基因ntA1762T/G1764A及S蛋白I126T联合变异的临床与实验研究

发布时间：2021-12-31 00:56

　　[目 的]探究BCP区及S区变异和HBsAg、HBsAb双阳的相关性及ntA1762T/G1764A和I126T联合变异对HBV生物学特性的影响。[方 法]本研究第一部分收集共250例慢性乙型肝炎患者的血清样本进行测序,以HBsAg和HBsAb双阳性的123例患者为实验组,仅HBsAg阳性的127例患者作为对照组,比较两组在B基因型和C基因型之间分布的差异、BCP区nt519-853片段和S区nt1655-2014片段的突变情况及联合突变与HBsAg、HBsAb双阳的相关性。第二部分根据第一部分和前期的研究结果,以碱基位点ntA1762T/G1764A双突变和氨基酸位点aaI126T（对应ntT531C突变）突变的联合变异组为实验组,野生型、ntA1762T/G1764A双突变或aaI126T（ntT531C）突变为实验对照组,体外构建含1.2倍HBV基因组的重组质粒,将目的质粒转染进肝癌细胞内表达,检测转染成功后的表达产物水平并分析结果。[结 果]1.在250例HBV感染患者中,单阳组（127例）和双阳组（123例）在年龄、病毒载量HBV-DNA上的差异无统计学意义（t=-0.252... 

【文章来源】：昆明医科大学云南省

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２．１－１?ＰＣＲ含５３丨位点基因分型片段电泳胶图（引物４５６Ｆ，约６５０ｂｐ，?２０００?ＤＮＡｍａｒｋｅｒ）??

结果如下：??２５Ｄ?２６０?２７§?．甲??？?ｉｒｓｉｓｌａｔｓ?？ｒｓｎｓｅｎｓｉｉｓ?ＳＣ：ＩＺ：Ｉｌ３Ｊｋ：＾ＡｋＳｌＹｒ＾？Ｔｌｉ：：ＪｉＢＪ￡ＩＣＣＩ：：Ｃ￡：ｋｌ??姐，輝繼?ｐ?＇?＾ＺＺｌＺＺｌｌｃｌｌＺｌｌｌ?ｃｌ：?Ｚｌｌｌ－ｋｌＺＺｌｌ?ｃｌ?ＺＩＺＺＩＺＺ?ＺＺＺ?ｌ＇：??ｃＺＺＪＺＺｌｌｃＩ＾Ｚｌｌｌ＾ｌＺＺＺＩＵｉｌＺＺｌｌｃＪＺＪＺＺｌＺＺＺＺＺｌ．??ＺＺＺｌＺＺｌｌｃＩｌＺｌｌｌＳｌＺＺｌｌｌｌｌＺＺｌｌＺｌＺｌＺＺｌＺＺＺＺＺｋ：??图２．１．１四种质粒ＢＧＨ引物片段（含１７６２／１７６４位点）??３５＃?３§§?獅?４１；???????????Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?１?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ，?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?ｔ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ??？?Ｉｒ￡３５ｌ２＾￡?？??於？ｎ－ｎ＿Ｆ６ｃ？＿ｒｓＨＨ５Ｍ：ｒ－ａ５Ｋ＿：５ｉ＞ｍ—Ｈ?２：盂孟：盂ｍ：至孟??图２．１．１四种质粒６０Ｆ引物片段（含５３１位点）??４４??

各质粒用灭菌蒸馏水稀释质粒浓度均为５００ｎｇ／ＭＬ，为更好进行下一步转染??实验，置－２０°Ｃ冰箱暂存。??２．２获得目的质粒??由此可获得四组质粒，其突变的变异情况如下表所示：??表２．２．１四种质粒对应位点突变情况??质粒组号?５３１?１７６２?１７６４?对应突变意义??Ａ?Ｃ?ＡＧ?５３１?突变??Ｂ?Ｔ?Ｔ?Ａ?１７６２／１７６４?突变??Ｃ?ＴＡＧ?野生型??Ｙ?Ｃ?Ｔ?Ａ?５３１及丨７６２／１７６４联合突变??四种质粒浓度均为５００ｎｇ／｜ａＬ，将获得的质粒进行下一步转染实验。??３．高倍显微镜下细胞转染后形态??在１０Ｃ０的高倍倒置相差显微镜下观察转染２４小时后的细胞形态如下：??■■??图３．１转染Ａ质粒４８ｈ后的细胞（Ａ组）图３．２转染Ｂ质粒４８ｈ后的细胞（Ｂ组）??■■??图３．３转染Ｃ质粒４８ｈ后的细胞（Ｃ组）?图３．４转染Ｙ质粒４８ｈ后的细胞（Ｙ组）??４５??

【参考文献】：
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硕士论文
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本文编号：3559312