HIV感染者免疫调节基因差异分析及长期HAART治疗者肝功能随访研究
发布时间：2022-01-03 07:15
随着高效抗逆转录病毒治疗（HAART）的应用,人类免疫缺陷病毒（HIV）感染者的预期寿命得到了提升,同时发病率与死亡率明显下降。而长期HIV感染引起的慢性炎症与异常免疫激活及其造成的非艾滋病相关并发症以及长期HAART累积的毒副作用更加引起了人们的注意。因此,本文为此开展了以下3部分研究。第一部分,为了探索与HIV感染引起的慢性免疫异常相关的基因,我们选取了65个免疫调节基因,在36例HIV感染者与健康对照的外周血单个核细胞（PBMC）样本中进行检测,筛选出了13例差异表达的基因。选取差异最明显的3个基因:A20,S1PR1,USP18,继续在48例具有不同HIV病毒载量的HAART治疗者的PBMC中进行检查,并将结果与病毒载量以及CD4+T细胞计数做相关分析,发现存在相关性。第二部分,为了研究A20在HIV感染中起到的作用,我们筛选出高表达A20的HIV靶细胞系:H9细胞,利用CRISPR/Cas9技术敲除H9细胞的A20基因。发现基因敲除后,细胞内p-p65蛋白表达升高,核转录因子NF-κB（nuclear factor-kappa B）活化水平升高,同时细胞...
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：92 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
免疫调节基因在HIV感染者、HAART治疗者及正常健康对照之间的表达差异HIV感染未治疗者（12例，病毒载量>10,000copies/ml）；HAART治疗病毒学抑制成功者（12例，病毒载量低于检测下限）；正常健康对照（12例）
浙江大学硕士学位论文正文第一部分实验结果153.2差异表达的免疫调节基因与CD4+T细胞计数及病毒载量之间的关系这些基因参与固有免疫调节，因此可能与疾病进展和HIV复制有关。如3.1所示A20、S1PR1和USP18是三个差异表达最多的基因。同时考虑到先前的12例未治疗者均为高病毒载量水平（>10,000copies/ml），而12例HAART治疗者的病毒载量均低于检测值下限，因此我们另选了48例具有不同病毒载量水平的HAART治疗者，检测其PBMC中A20、S1PR1和USP18的表达水平，使用Spearman相关检验来评估这三个基因的表达水平与CD4+T细胞计数以及病毒载量之间的关系，如图2所示。A20与CD4+T细胞计数呈正相关（P<0.05,R=0.31）；S1PR1与CD4+T细胞计数呈正相关（P<0.05,R=0.41）；USP18与病毒载量呈正相关(P<0.001，R=0.39)。图1.248例HAART治疗者PBMC免疫调节基因表达水平与病毒载量以及CD4+T细胞计数的相关性48例HAART治疗者的病毒载量自低于检测下限至80,000copies/ml不等。病毒载量低于检测下限者将值设置为1copy/ml(log100)来更好的绘制图形。用Spearman相关检验计算P值。P<0.05被认为具有统计学意义。VL，病毒载量。
浙江大学硕士学位论文正文第二部分材料与方法24PCR管美国Axygen2.1.3细胞株与质粒H9细胞、CEM-SS细胞、THP-1细胞、U937细胞、293T细胞均由本实验室常规保存。质粒lentiCRISPRv2，pMD2.G，psPAX2均购自Addgene；质粒pNL(4-3)由中国科学院上海巴斯德研究所惠赠，本实验室保存。lentiCRISPRv2质粒图谱如图2.1所示。图2.1lentiCRISPRv2质粒图谱2.2实验方法2.2.1q-PCR与Westernblot筛选A20高表达细胞系2.2.1.1细胞培养相关基本操作（1）细胞复苏：从液氮罐中取出冻存细胞，迅速放入37℃水浴中，轻柔摇晃，尽快解冻；用75%酒精消毒冻存管后，移至超净台，将细胞悬液转移至15ml离心管，加入10倍体积的细胞培养液，低速离心5分钟（125xg，室温），弃
【参考文献】：
期刊论文
[1]Non invasive evaluation of liver fibrosis in paediatric patients with nonalcoholic steatohepatitis[J]. Angelo Iacobellis,Matilde Marcellini,Angelo Andriulli,Francesco Perri,Gioacchino Leandro,Rita Devito,Valerio Nobili. World Journal of Gastroenterology. 2006(48)
本文编号：3565830
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：92 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
免疫调节基因在HIV感染者、HAART治疗者及正常健康对照之间的表达差异HIV感染未治疗者（12例，病毒载量>10,000copies/ml）；HAART治疗病毒学抑制成功者（12例，病毒载量低于检测下限）；正常健康对照（12例）
浙江大学硕士学位论文正文第一部分实验结果153.2差异表达的免疫调节基因与CD4+T细胞计数及病毒载量之间的关系这些基因参与固有免疫调节，因此可能与疾病进展和HIV复制有关。如3.1所示A20、S1PR1和USP18是三个差异表达最多的基因。同时考虑到先前的12例未治疗者均为高病毒载量水平（>10,000copies/ml），而12例HAART治疗者的病毒载量均低于检测值下限，因此我们另选了48例具有不同病毒载量水平的HAART治疗者，检测其PBMC中A20、S1PR1和USP18的表达水平，使用Spearman相关检验来评估这三个基因的表达水平与CD4+T细胞计数以及病毒载量之间的关系，如图2所示。A20与CD4+T细胞计数呈正相关（P<0.05,R=0.31）；S1PR1与CD4+T细胞计数呈正相关（P<0.05,R=0.41）；USP18与病毒载量呈正相关(P<0.001，R=0.39)。图1.248例HAART治疗者PBMC免疫调节基因表达水平与病毒载量以及CD4+T细胞计数的相关性48例HAART治疗者的病毒载量自低于检测下限至80,000copies/ml不等。病毒载量低于检测下限者将值设置为1copy/ml(log100)来更好的绘制图形。用Spearman相关检验计算P值。P<0.05被认为具有统计学意义。VL，病毒载量。
浙江大学硕士学位论文正文第二部分材料与方法24PCR管美国Axygen2.1.3细胞株与质粒H9细胞、CEM-SS细胞、THP-1细胞、U937细胞、293T细胞均由本实验室常规保存。质粒lentiCRISPRv2，pMD2.G，psPAX2均购自Addgene；质粒pNL(4-3)由中国科学院上海巴斯德研究所惠赠，本实验室保存。lentiCRISPRv2质粒图谱如图2.1所示。图2.1lentiCRISPRv2质粒图谱2.2实验方法2.2.1q-PCR与Westernblot筛选A20高表达细胞系2.2.1.1细胞培养相关基本操作（1）细胞复苏：从液氮罐中取出冻存细胞，迅速放入37℃水浴中，轻柔摇晃，尽快解冻；用75%酒精消毒冻存管后，移至超净台，将细胞悬液转移至15ml离心管，加入10倍体积的细胞培养液，低速离心5分钟（125xg，室温），弃
【参考文献】：
期刊论文
[1]Non invasive evaluation of liver fibrosis in paediatric patients with nonalcoholic steatohepatitis[J]. Angelo Iacobellis,Matilde Marcellini,Angelo Andriulli,Francesco Perri,Gioacchino Leandro,Rita Devito,Valerio Nobili. World Journal of Gastroenterology. 2006(48)
本文编号：3565830
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3565830.html
最近更新
教材专著
