竹节参β-香树素合成酶基因克隆及生物信息学分析

发布时间：2022-01-05 13:25

　　目的克隆三萜皂苷代谢关键酶竹节参β-香树素合成酶（β-AS）基因,采用生物信息学分析其序列及其结构与功能,为竹节参合成及调控机制研究提供基础。方法提取竹节参叶片RNA,扩增β-AS基因编码区序列,将序列连接至pMDTM18-T载体进行克隆、测序,并利用生物信息学分析比较移栽品和栽培品竹节参β-AS蛋白的特征,构建竹节参β-AS蛋白的系统进化树。结果克隆出移栽品和栽培品竹节参的β-AS基因编码区序列,开放阅读框（ORF）均为2 286 bp,编码761个氨基酸。2个品种β-AS蛋白在细胞中的基本结构和功能是一致的,但两者之间存在8个氨基酸差异,使两者的蛋白质二级结构、三级结构磷酸化位点以及理化性质存在差异,可能会导致两者的催化活性存在差异。结论克隆得到野生移栽品和栽培品竹节参的β-AS基因,并对2个品种β-AS蛋白进行了生物信息学分析和比较,为今后研究该酶的结构特征、功能以及其与皂苷含量的相关性提供参考,也为竹节参合成生物学研究提供了生物基因元件。 

【文章来源】：中草药. 2020,51(19)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

竹节参总RNA电泳图

竹节参β-AS基因全长序列电泳结果

用SOPMA在线预测竹节参β-AS蛋白二级结构，如图3所示，深溪河移栽品竹节参和双河镇栽培品竹节参β-AS蛋白主要由α-螺旋和无规则卷曲构成，深溪河移栽品竹节参β-AS蛋白包含α-螺旋（40.08%）、β-转角（10.12%）、无规则卷曲（32.46%）、延伸链（17.35%）；双河镇栽培品竹节参β-AS蛋白包含α-螺旋（38.76%）、β-转角（9.99%）、无规则卷曲（34.03%）、延伸链（17.21%）。两者的多肽链中有8位点对应的氨基酸不同，其中第99、652位氨基酸的不同没有引起两者二级结构的不同，而第53、292、399、400、450、470位氨基酸的变化使两者的多肽链折叠方式有所改变。2.2.6 竹节参β-AS基因编码蛋白三级结构预测

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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本文编号：3570431