天麻GeCPR与共生蜜环菌Lac基因克隆及其功能鉴定

发布时间：2022-01-06 22:30

　　天麻是一种名贵的中药材,属于一种真菌营养型兰科植物,能镇静催眠、抗惊厥眩晕、镇痛、改善记忆、治疗老年痴呆,还能够提高免疫力。天麻主要药用活性成分为天麻素和对羟基苯甲醇,药用天麻两者总含量不能低于0.25%。天麻中活性成分的合成与细胞色素P450相关,而细胞色素P450还原酶（CPR）是细胞色素P450酶系（CYPs）中重要的组成成分,为CYPs提供电子。蜜环菌是天麻生长过程中最重要的大型共生真菌,侵入到天麻体内的蜜环菌将被天麻消化转化为营养物质供给自己生长,蜜环菌的生长影响到天麻产量和品质。蜜环菌主要靠降解菌材中的木质纤维素为葡萄糖等小分子有机物供蜜环菌生长需要。蜜环菌利用菌材能力与蜜环菌分泌漆酶活性有关。目前,天麻是药食同源植物,市场需求量大,主要靠人工栽培天麻满足市场需求。然而,人工栽培天麻功能活性成分含量和利用菌材效率比较低。因此,本研究利用生物工程技术,首先建立蜜环菌转基因技术,然后通过蜜环菌天麻转录组测序,基于转录组数据,筛选天麻细胞色素P450还原酶基因（GeCPR）和蜜环菌漆酶基因（Lac）,找出他们CDS序列,通过RACE-PCR技术扩增出这些基因全长序列,构建Lac基... 

【文章来源】：昆明理工大学云南省

【文章页数】：104 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

真核表达载体pHGWL7-mRFP1的构建流程

昆明理工大学硕士学位论文20门载体pENTR-2B分别使用BamH1和Xho1进行双酶切，通过热激转化法进行连接。提取pENTR-MRFP1质粒，与植物表达载体pHGWL7通过Gateway技术进行连接，获得植物表达载体pHGWL7-mRFP1。然后以pHGWL7-mRFP1的质粒为模板进行PCR反应，获得一条750bp左右的条带（图2.2），再用BamH1和Xho1双酶切该质粒，能获得750bp左右的条带（图2.3），说明真核表达载体pHGWL7-mRFP1构建成功。图2.2PCR检测mRFP1基因Figure2.1PCRdetectionofmRFP1gene图2.3pHGWL7-mRFP1重组质粒BamHI和XhoI双酶切Figure2.3DoubledigestionofBamHIandXhoIbyrecombinantplasmidpHGWL7-mRFP1M：DL5000DNAMarker；1：pMD18-mRFP1重组质粒；2：pENTR-mRFP1重组质粒；3-4:pHGWL7-mRFP1重组质粒BamHI和XhoI双酶切。750bp

昆明理工大学硕士学位论文20门载体pENTR-2B分别使用BamH1和Xho1进行双酶切，通过热激转化法进行连接。提取pENTR-MRFP1质粒，与植物表达载体pHGWL7通过Gateway技术进行连接，获得植物表达载体pHGWL7-mRFP1。然后以pHGWL7-mRFP1的质粒为模板进行PCR反应，获得一条750bp左右的条带（图2.2），再用BamH1和Xho1双酶切该质粒，能获得750bp左右的条带（图2.3），说明真核表达载体pHGWL7-mRFP1构建成功。图2.2PCR检测mRFP1基因Figure2.1PCRdetectionofmRFP1gene图2.3pHGWL7-mRFP1重组质粒BamHI和XhoI双酶切Figure2.3DoubledigestionofBamHIandXhoIbyrecombinantplasmidpHGWL7-mRFP1M：DL5000DNAMarker；1：pMD18-mRFP1重组质粒；2：pENTR-mRFP1重组质粒；3-4:pHGWL7-mRFP1重组质粒BamHI和XhoI双酶切。750bp

【参考文献】：
期刊论文
[1]小麦细胞色素P450基因克隆及其序列研究[J]. 高璇.  生物化工. 2018(05)
[2]不同栽培模式对昭通乌天麻产量及品质的影响[J]. 桑正林,杨顺强,赵启君,武婷.  河南农业科学. 2018(08)
[3]基于细胞色素P450单加氧酶介导的4-甲酚氧化降解途径的天麻素生物合成[J]. 钟贝芬,杜磊,李众,张伟,张兴旺,李菁,黄淑兰,胡翔,李盛英,刘琨.  湖南师范大学自然科学学报. 2018(04)
[4]微生物细胞色素P450酶及其对异源物质的代谢研究进展[J]. 丁俊美,李国涛,黄遵锡.  应用与环境生物学报. 2018(03)
[5]云芝NADPH-细胞色素P450还原酶在大肠杆菌中表达及酶学特性分析[J]. 孙雪娃,何超,方泽民,肖亚中.  生物工程学报. 2018(07)
[6]天麻研究新进展[J]. 韩大荣.  中国处方药. 2018(04)
[7]漆酶及其应用研究进展[J]. 王馥丽,赵鹏,裴承新,黄启斌,蒋辉,习海玲.  生命科学仪器. 2017(05)
[8]昭通天麻产业发展中菌材的探析[J]. 马勋静,田治蛟,戴堃,李德朗,顾盼,田孟华,周明月,杨菊.  园艺与种苗. 2017(08)
[9]漆酶可降解底物种类的研究进展[J]. 张泽雄,刘红艳,邢贺,马钰.  生物技术通报. 2017(10)
[10]猪苓与天麻共生蜜环菌类群的比较[J]. 门金鑫,邢晓科,郭顺星.  菌物学报. 2017(08)

博士论文
[1]中国蜜环菌的遗传学与系统学研究[D]. 秦国夫.中国林业科学研究院 2002

硕士论文
[1]天麻林下仿野生种植部分关键技术的研究[D]. 李振斌.成都中医药大学 2016
[2]固定化漆酶用于废水深度处理的研究[D]. 刘影.齐鲁工业大学 2015



本文编号：3573279