杜仲DIRIGENT基因原核表达及功能分析
发布时间：2022-01-07 06:54
杜仲（Eucommia ulmoides Oliver）是第三纪孑遗植物,单科单属单种,在中国主要分布于四川、湖南、贵州等地区。杜仲药用成分主要为苯丙素类、环烯醚萜类、木脂素类等化合物,且木脂素类化合物中的松脂醇双葡萄糖苷具有双向调节血压功效。研究表明,Dirigent（DIR）蛋白在生物氧化酶或氧化剂的存在下,可以指导木质素单体偶联形成二聚体,进而参与木质素和木脂素分子的生物合成,并在响应生物和非生物胁迫因素诱导过程中有重要作用。因此,对DIR蛋白的功能进行研究具有重要的价值。本研究以实验室前期克隆得到EuDIR1蛋白编码基因为基础,对EuDIR1基因进行原核表达、同时进行遗传转化方面的研究,研究结果如下:1、EuDIR1基因原核表达及蛋白纯化本研究构建携带His标签原核表达载体pET-30a-EuDIR1和pMCSG19-EuDIR1,将原核表达载体分别转化表达宿主菌E.coli BL21（DE3）。结果显示,15℃下0.1 mmol/L IPTG诱导6 h后,蛋白的沉积量达到最高值,但其表达模式主要为包涵体。对包涵体进行纯化,收集目的蛋白,对其进行复性后,经Western Blo...
【文章来源】：贵州大学贵州省 211工程院校
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
DIR指导苯氧基自由基偶联反应机理（Hallsetal.,2004）
贵州大学硕士学位论文素在植物中分布广泛，是重要的次生代谢产物。体外生化分析表明，FiD化活性，但在生物氧化酶或氧化剂的存在下，可以立体选择性地将 2 分联生产 1 分子(+)-松脂醇（Davin et al., 1997）。例如，五味子（Schisandra IR 蛋白（Kim et al., 2012）、亚麻（Linum usitatissimum）中的 LuDIR1 蛋白5）、大豆（Glycine max）中的 GmDIR22 蛋白（Li et al., 2017）和小麦（TriticuIR13 蛋白（Ma et al., 2015）都具有相同的功能。松柏醇是形成木脂素二松柏醇和芥子醇以及其他单木醇对香豆醇也被聚合成大分子木质素，某些脂素和木质素的生产中重叠（Davin et al., 2003）。
图 1.3 半棉酚氧化偶联产生棉酚ative coupling of hemigossypol results in two atropiso境反应素单体植物酚类的自由基耦合以生产细胞壁聚合物et al., 2016; Espi eira et al., 2011）。因此，这个基因胁迫，包括创伤(Ralph et al., 2007)、脱水、低温、和聚乙二醇。DIR 基因在响应由真菌和昆虫（Ralp., 2007; Reboledo et al., 2015）是具有重要的意义。的木脂素提取物对大豆疫霉菌丝生长具有一定的够有效地将 E-松柏醇偶联成(+)-松脂醇，表明大豆中的合成，导致大豆对大豆疫霉菌菌丝生长的抑制作物信息学分析
【参考文献】：
期刊论文
[1]基于“中药作用机理辅助解析系统”的杜仲抗高血压作用机制研究[J]. 叶小彤,张百霞,王慧慧,何帅兵,张小华,王耘. 中国中药杂志. 2015(19)
[2]杜仲强筋健骨的药理作用及临床应用研究进展[J]. 朱福群,唐芳瑞,刘荣华. 江西中医药大学学报. 2015(04)
[3]杜仲的化学成分及药理作用研究进展[J]. 冯晗,周宏灏,欧阳冬生. 中国临床药理学与治疗学. 2015(06)
[4]杜仲中槲皮素、京尼平苷及桃叶珊瑚苷对小鼠成骨样细胞系MC3T3-E1增殖和分化的影响[J]. 牟丽秋,杜俊,胡旖耘,刘新义,刘亭亭,王传邦,吴军勇,向大雄. 药物评价研究. 2015(02)
[5]杜仲药理与毒理研究进展[J]. 张京京,杜红岩,李钦,丁艳霞. 河南大学学报(医学版). 2014(03)
[6]水稻dirigent基因家族生物信息学分析[J]. 穰中文,周清明. 湖南农业大学学报(自然科学版). 2013(02)
[7]杜仲绿原酸对高脂模型小鼠降血脂作用研究[J]. 王建辉,刘永乐,李赤翎,俞健,李向红,王发祥,李艳. 食品工业科技. 2012(15)
[8]杜仲叶桃叶珊瑚苷的酶法提取及其抑菌活性[J]. 郑杰,刘端,赵肃清,苏娟,颜秋萍,陈磊,肖奕,张春梅. 中药材. 2012(02)
[9]杜仲总黄酮对大鼠成骨细胞护骨素表达的影响[J]. 李三华,陈全利,何志全,凌锌. 安徽农业科学. 2011(25)
[10]杜仲醇提物和水提物对小鼠免疫性肝损伤保护作用的研究[J]. 高银辉,史秀玲,王美,王旭,李粲,周程艳. 华北煤炭医学院学报. 2011(02)
博士论文
[1]杜仲防治绝经后骨质疏松及其机理研究[D]. 张蓉.第四军医大学 2008
硕士论文
[1]杜仲Dirigent编码基因克隆及表达分析[D]. 王维东.贵州大学 2017
[2]Western Blot检测转基因水稻PMI蛋白质[D]. 荣瑞娟.河北农业大学 2015
本文编号：3574051
【文章来源】：贵州大学贵州省 211工程院校
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
DIR指导苯氧基自由基偶联反应机理（Hallsetal.,2004）
贵州大学硕士学位论文素在植物中分布广泛，是重要的次生代谢产物。体外生化分析表明，FiD化活性，但在生物氧化酶或氧化剂的存在下，可以立体选择性地将 2 分联生产 1 分子(+)-松脂醇（Davin et al., 1997）。例如，五味子（Schisandra IR 蛋白（Kim et al., 2012）、亚麻（Linum usitatissimum）中的 LuDIR1 蛋白5）、大豆（Glycine max）中的 GmDIR22 蛋白（Li et al., 2017）和小麦（TriticuIR13 蛋白（Ma et al., 2015）都具有相同的功能。松柏醇是形成木脂素二松柏醇和芥子醇以及其他单木醇对香豆醇也被聚合成大分子木质素，某些脂素和木质素的生产中重叠（Davin et al., 2003）。
图 1.3 半棉酚氧化偶联产生棉酚ative coupling of hemigossypol results in two atropiso境反应素单体植物酚类的自由基耦合以生产细胞壁聚合物et al., 2016; Espi eira et al., 2011）。因此，这个基因胁迫，包括创伤(Ralph et al., 2007)、脱水、低温、和聚乙二醇。DIR 基因在响应由真菌和昆虫（Ralp., 2007; Reboledo et al., 2015）是具有重要的意义。的木脂素提取物对大豆疫霉菌丝生长具有一定的够有效地将 E-松柏醇偶联成(+)-松脂醇，表明大豆中的合成，导致大豆对大豆疫霉菌菌丝生长的抑制作物信息学分析
【参考文献】：
期刊论文
[1]基于“中药作用机理辅助解析系统”的杜仲抗高血压作用机制研究[J]. 叶小彤,张百霞,王慧慧,何帅兵,张小华,王耘. 中国中药杂志. 2015(19)
[2]杜仲强筋健骨的药理作用及临床应用研究进展[J]. 朱福群,唐芳瑞,刘荣华. 江西中医药大学学报. 2015(04)
[3]杜仲的化学成分及药理作用研究进展[J]. 冯晗,周宏灏,欧阳冬生. 中国临床药理学与治疗学. 2015(06)
[4]杜仲中槲皮素、京尼平苷及桃叶珊瑚苷对小鼠成骨样细胞系MC3T3-E1增殖和分化的影响[J]. 牟丽秋,杜俊,胡旖耘,刘新义,刘亭亭,王传邦,吴军勇,向大雄. 药物评价研究. 2015(02)
[5]杜仲药理与毒理研究进展[J]. 张京京,杜红岩,李钦,丁艳霞. 河南大学学报(医学版). 2014(03)
[6]水稻dirigent基因家族生物信息学分析[J]. 穰中文,周清明. 湖南农业大学学报(自然科学版). 2013(02)
[7]杜仲绿原酸对高脂模型小鼠降血脂作用研究[J]. 王建辉,刘永乐,李赤翎,俞健,李向红,王发祥,李艳. 食品工业科技. 2012(15)
[8]杜仲叶桃叶珊瑚苷的酶法提取及其抑菌活性[J]. 郑杰,刘端,赵肃清,苏娟,颜秋萍,陈磊,肖奕,张春梅. 中药材. 2012(02)
[9]杜仲总黄酮对大鼠成骨细胞护骨素表达的影响[J]. 李三华,陈全利,何志全,凌锌. 安徽农业科学. 2011(25)
[10]杜仲醇提物和水提物对小鼠免疫性肝损伤保护作用的研究[J]. 高银辉,史秀玲,王美,王旭,李粲,周程艳. 华北煤炭医学院学报. 2011(02)
博士论文
[1]杜仲防治绝经后骨质疏松及其机理研究[D]. 张蓉.第四军医大学 2008
硕士论文
[1]杜仲Dirigent编码基因克隆及表达分析[D]. 王维东.贵州大学 2017
[2]Western Blot检测转基因水稻PMI蛋白质[D]. 荣瑞娟.河北农业大学 2015
本文编号：3574051
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