干扰E2F1基因表达对EBV阳性淋巴瘤Raji细胞增殖和迁移的影响
发布时间：2022-01-12 01:56
[目的]:E2F转录因子1（E2F transcription factor 1,E2F1）在人类多种肿瘤中过度表达,我们前期实验也发现E2F1基因在EBV转化的淋巴母细胞LCLs中高表达。本实验通过构建稳定低表达E2F1基因的Raji细胞,通过q RT-PCR和Western blot检测E2F1基因的表达情况,采用CCK-8实验、软琼脂克隆形成实验、检测细胞周期和迁移侵袭实验观察干扰E2F1基因表达后Raji细胞的增殖和迁移能力,观察E2F1基因表达改变前后EBV阳性淋巴瘤Raji细胞增殖和迁移能力的影响,为EBV相关肿瘤的分子机制研究提供依据。[方法]:采用q RT-PCR及Western Blot检测EBV转化淋巴母细胞（LCL7）与EBV阳性Raji细胞中E2F1基因的表达情况,构建针对E2F1基因的慢病毒干扰载体E2F1-sh RNA-GFP-PURO,建立E2F1稳定低表达的Raji细胞系（Raji/E2F1 sh RNA1、Raji/E2F1 sh RNA2）,通过倒置荧光显微镜观察细胞内绿色荧光情况,采用q RT-PCR和Western Blot验证E2F1基因的干扰...
【文章来源】：南华大学湖南省
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
BCA蛋白定量分析图
干扰靶点 siRNA1 序列：CGCTATGAGACCTCACTGAAT干扰靶点 siRNA2 序列：CTACTCAGCCTGGAGCAAGAA所选用的干扰载体pHBLV-U6-MCS-CMV-ZsGreen-PGK-PURO载体图谱（图2.2）图 2.2 载体图谱（2）引物退火形成带粘性末端的双链片段：其体系如下（20ul）：Component Volume/Concentration10xBuffer 2μlTris-cl PH7.5 100mMNacl 1MEDTA 10mMshDNA-R/shDNA-F 1/1μlH2O 16μl退火步骤如下：Temperature Time95℃ 10min75℃ 10min
第 3 章 结果测 EBV 阳性淋巴瘤 Raji 细胞和 EBV 转化 中 E2F1 基因的表达水平RT-PCR 检测 E2F1 在 mRNA 水平的表达情况提取 LCL7 和 Raji 细胞的总 RNA，首先检测 RNA 完整脂糖凝胶电泳可见：18S、28S 条带清楚，无弥散带且条带亮度的 2 倍，说明所提 RNA 结构完整，无降解。测得 RNA 的 OD260/280 在 1.8~2.0 之间，说明所提 R续实验。将所提 RNA 逆转录并扩增，进行 qRT-PCR 检aji 系的 E2F1 mRNA 表达高于 LCL7 细胞，差异具有统05）。（图 3.1、图 3.2）
【参考文献】：
期刊论文
[1]Prognostic values of the integrated model incorporating the volume of metastatic regional cervical lymph node and pretreatment serum Epstein-Barr virus DNA copy number in predicting distant metastasis in patients with N1 nasopharyngeal carcinoma[J]. Ji-Jin Yao,Guan-Qun Zhou,Ya-Qin Wang,Si-Yang Wang,Wang-Jian Zhang,Ya-Nan Jin,Fan Zhang,Li Li,Li-Zhi Liu,Zhi-Bin Cheng,Jun Ma,Zhen-Yu Qi,Ying Sun. Chinese Journal of Cancer. 2017(12)
[2]B细胞淋巴瘤中E2F1、BIRC5、PLK1蛋白表达及其临床意义[J]. 贺荣芳,谢黎明,赵强,胡义燕,龚邵新,阳帅,张小丽. 临床与实验病理学杂志. 2012(03)
硕士论文
[1]PLK1表达下调诱导Raji细胞凋亡及其分子机制的研究[D]. 朱娟.南华大学 2017
[2]PLK1基因沉默抑制淋巴瘤Raji细胞增殖和侵袭[D]. 钟雅婷.南华大学 2016
[3]EB病毒转化淋巴母细胞中相关基因表达的检测与分析[D]. 付婷.南华大学 2013
[4]EB病毒转化淋巴母细胞的差异表达基因筛选[D]. 戴永明.南华大学 2011
本文编号：3583876
【文章来源】：南华大学湖南省
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
BCA蛋白定量分析图
干扰靶点 siRNA1 序列：CGCTATGAGACCTCACTGAAT干扰靶点 siRNA2 序列：CTACTCAGCCTGGAGCAAGAA所选用的干扰载体pHBLV-U6-MCS-CMV-ZsGreen-PGK-PURO载体图谱（图2.2）图 2.2 载体图谱（2）引物退火形成带粘性末端的双链片段：其体系如下（20ul）：Component Volume/Concentration10xBuffer 2μlTris-cl PH7.5 100mMNacl 1MEDTA 10mMshDNA-R/shDNA-F 1/1μlH2O 16μl退火步骤如下：Temperature Time95℃ 10min75℃ 10min
第 3 章 结果测 EBV 阳性淋巴瘤 Raji 细胞和 EBV 转化 中 E2F1 基因的表达水平RT-PCR 检测 E2F1 在 mRNA 水平的表达情况提取 LCL7 和 Raji 细胞的总 RNA，首先检测 RNA 完整脂糖凝胶电泳可见：18S、28S 条带清楚，无弥散带且条带亮度的 2 倍，说明所提 RNA 结构完整，无降解。测得 RNA 的 OD260/280 在 1.8~2.0 之间，说明所提 R续实验。将所提 RNA 逆转录并扩增，进行 qRT-PCR 检aji 系的 E2F1 mRNA 表达高于 LCL7 细胞，差异具有统05）。（图 3.1、图 3.2）
【参考文献】：
期刊论文
[1]Prognostic values of the integrated model incorporating the volume of metastatic regional cervical lymph node and pretreatment serum Epstein-Barr virus DNA copy number in predicting distant metastasis in patients with N1 nasopharyngeal carcinoma[J]. Ji-Jin Yao,Guan-Qun Zhou,Ya-Qin Wang,Si-Yang Wang,Wang-Jian Zhang,Ya-Nan Jin,Fan Zhang,Li Li,Li-Zhi Liu,Zhi-Bin Cheng,Jun Ma,Zhen-Yu Qi,Ying Sun. Chinese Journal of Cancer. 2017(12)
[2]B细胞淋巴瘤中E2F1、BIRC5、PLK1蛋白表达及其临床意义[J]. 贺荣芳,谢黎明,赵强,胡义燕,龚邵新,阳帅,张小丽. 临床与实验病理学杂志. 2012(03)
硕士论文
[1]PLK1表达下调诱导Raji细胞凋亡及其分子机制的研究[D]. 朱娟.南华大学 2017
[2]PLK1基因沉默抑制淋巴瘤Raji细胞增殖和侵袭[D]. 钟雅婷.南华大学 2016
[3]EB病毒转化淋巴母细胞中相关基因表达的检测与分析[D]. 付婷.南华大学 2013
[4]EB病毒转化淋巴母细胞的差异表达基因筛选[D]. 戴永明.南华大学 2011
本文编号：3583876
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3583876.html
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