fancd2os基因促进小鼠睾丸间质细胞TM3凋亡的初步研究

发布时间：2022-01-16 19:31

　　目的:在课题组前期研究的基础上,构建稳定过表达fancd2os基因的小鼠睾丸间质细胞（TM3）模型,分析fancd2os过表达对紫外（UV）诱导TM3细胞凋亡的影响;同时采用RNA干扰策略沉默fancd2os基因观察UV诱导TM3细胞凋亡的变化;并探讨fancd2os促进TM3细胞凋亡的可能机制;借助fancd2os过表达模型及fancd2os沉默分析TM3睾酮分泌的改变;为深入研究该基因在精子发生中的具体作用提供线索。方法:1.过表达慢病毒载体瞬时感染HEK293T细胞;采用RT-PCR和Western blotting检测fancd2os在HEK293T细胞中的表达情况;2.建立稳定过表达fancd2os的TM3细胞模型;采用RT-PCR和Western blotting检测fancd2os mRNA和蛋白质的稳定表达;3.通过间接免疫荧光染色观察FANCD2OS蛋白在TM3中的定位分布;4.采用UV照射诱导TM3细胞凋亡,利用Western blotting检测过表达fancd2os后TM3凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase-3、BAX、BCL-2和BCL-XL的变化;5... 

【文章来源】：山西医科大学山西省

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

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前言
第一部分 fancd2os稳定过表达TM3模型的构建及其对UV诱导TM3细胞凋亡的影响
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 实验方法
    2 结果
        2.1 fancd2os过表达慢病毒载体转染HEK293T细胞及鉴定
        2.2 fancd2os过表达慢病毒载体稳定转染TM3细胞及鉴定
        2.3 细胞免疫荧光染色检测FANCD2OS蛋白在TM3细胞中的定位
        2.4 Westernblotting检测UV诱导TM3细胞凋亡蛋白的变化
    3 讨论
    4 结论
第二部分 fancd2os沉默及其对UV诱导TM3细胞凋亡变化的影响
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 实验方法
    2 结果
        2.1 fancd2os慢病毒干扰载体转染TM3细胞及鉴定
        2.2 Westernblotting检测细胞凋亡相关蛋白的变化
        2.3 Westernblotting检测凋亡抑制剂存在时TM3细胞凋亡的变化
    3 讨论
    4 结论
第三部分 fancd2os对TM3细胞睾酮分泌的影响
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 实验方法
    2 结果
        2.1 ELISA检测过表达fancd2os对TM3细胞睾酮分泌的影响
        2.2 ELISA检测fancd2os沉默对TM3细胞睾酮分泌的影响
        2.3 ELISA检测fancd2os过表达后加入凋亡抑制剂睾酮的变化
    3 讨论
    4 结论
参考文献
综述
    参考文献
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]小鼠Fancd2os基因真核表达质粒的构建及其对人胚肾上皮细胞增殖和凋亡的影响[J]. 李婷,贾三三,温丽敏,白欣艳,王玉晶,王海龙,解军,郭睿.  中国生物制品学杂志. 2016(06)
[2]精子发生的调节机制及其进展[J]. 朱倩,崔毓桂.  生殖医学杂志. 2016(04)



本文编号：3593290