牵牛RING型泛素连接酶PnLOG2基因克隆及功能验证
发布时间：2022-01-27 14:08
植物在生长发育过程中会遭受对其产生不利影响的生物胁迫和非生物胁迫。干旱、盐、碱等非生物胁迫会引起植物体内极其复杂的分子反应。泛素/26S蛋白酶体途径（UPP）是细胞内高效的、有高度选择特性的蛋白降解途径。RING型E3泛素连接酶在UPP中种类最多,它在底物的特异性选择降解过程中起关键作用。研究表明有RING型E3泛素连接酶基因参与对不同非生物胁迫的应答,本研究以圆叶牵牛为试验材料,克隆出RING型E3泛素连接酶基因PnLOG2,对该基因的表达模式和功能进行了初步探究,旨在为阐明RING型E3泛素连接酶参与植物非生物胁迫的机理提供理论依据。本研究结果如下:（1）从圆叶牵牛（Ipomoea purpurea Lam.）中同源克隆出RING型E3泛素连接酶基因PnLOG2,全长为1022 bp。经生物信息学分析,预测其开放阅读框长度为941 bp（51-992 bp）,共编码313个氨基酸残基,为可溶性非跨膜蛋白,不存在信号肽及导肽,与番茄亲缘关系最近,与其同源性较高的序列中都含有保守的zf-C3HC4型RING-Ubox超家族结构域,启动子区顺式作用原件分析结果表明其可能参与非生物胁迫。（...
【文章来源】：哈尔滨师范大学黑龙江省
【文章页数】：84 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
渗透胁迫与ABA信号转导途径(zhuetal，2016)
SOS通路图示(Mahajanetal，2008)
第2章牵牛PnLOG2基因克隆及生物信息学分析17运用SOPMA(https://npsa-prabi.ibcp.fr/cgi-bin/npsa_automat.pl?page=/NPSA/npsa_sopma.html)网站，SOPMA构象种类选择3类，输入序列，其他参数默认，预测蛋白二级结构。(3)蛋白三级结构的预测利用SWISS-MODEL(http://swissmodel.expasy.org/)在线的同源建模软件，选择AutomatedMode开始建模，输入FASTA、Clustal等格式的序列，输入标题和邮箱，运行寻找模板，在得到模版后，选择最佳的模板进行建模，并输出PDB文件。并用SAVE(http://services.mbi.ucla.edu/SAVES/)在线软件中的ERRAT、VERIFY3D和PROCHECK对模型进行检测，将从SWISS-MODEL网站中得到的PDB文件输入SAVE网站进行检测并得出Ramachandran图。2.3结果与分析2.3.1植物总RNA提取从圆叶牵牛(IpomoeapurpureaLam.)中提取总RNA进行电泳检测，结果如图2-1，可见两条清晰明亮的带，这两条带分别为28S和18S，其中28S的亮度达到了18S亮度的两倍以上，确定RNA质量符合要求，可以用于后续实验。图2-1圆叶牵牛总RNA提取Figure2-1TotalRNAextractionofmorninggloryM：DL2000Marker；1-2：圆叶牵牛总RNAM:DL2000Marker;1-2;TotalRNAroundleafmorningglory图2-2PnLOG2基因PCR扩增电泳图Figure2-2PnLOG2genePCRamplificationelectrophoresisfigureM：DL2000Marker；1-2：PnLOG2基因PCR产物M:DL2000Marker;1-2;PnLOG2genePCRofproduct
【参考文献】：
期刊论文
[1]矮牵牛PhUBC2-1基因响应干旱胁迫表达与功能分析[J]. 马健宇,金晓霞,陈超,于丽杰. 分子植物育种. 2020(23)
[2]大豆UBC基因家族鉴定及GmUBC46基因的功能初步分析[J]. 陈超,乔艳花,井常煦,卢文秀,金晓霞,于丽杰. 植物遗传资源学报. 2020(01)
[3]26S蛋白酶体调控微管蛋白的降解[J]. 潘婷,杨慕童,刘阳轩,孙秀强,涂升斌,Jan Smalle,汪松虎. 四川大学学报(自然科学版). 2019(02)
[4]圆叶牵牛对衡水湖野大豆的化感作用研究[J]. 高汝勇. 现代园艺. 2018(22)
[5]圆叶牵牛化学成分研究[J]. 李阳,肖朝江,刘健,沈怡,董相,姜北. 广西植物. 2019(07)
[6]植物应答非生物胁迫信号传导研究进展[J]. 刘铃,武小龙,诸葛强. 分子植物育种. 2018(02)
[7]泛素/26S蛋白酶体途径在水稻中的生物学功能研究进展[J]. 徐丹丹,孙帆,王银晓,石英尧,王文生,傅彬英. 中国农业科技导报. 2018(01)
[8]牵牛E3泛素连接酶PNRma1基因的克隆及抗旱相关性分析[J]. 代锦绣,董轩名,倪欢欢,董延龙,金晓霞. 中国林副特产. 2017(06)
[9]RING-finger类型泛素连接酶E3及其与植物抗旱性的关系[J]. 秦岭,杨延兵,陈二影,张华文,王海莲,刘宾,管延安. 分子植物育种. 2017(07)
[10]泛素化修饰调控脱落酸介导的信号途径[J]. 于菲菲,谢旗. 遗传. 2017(08)
博士论文
[1]柠条锦鸡儿与中间锦鸡儿中4个E3泛素连接酶基因的功能分析[D]. 岳文冉.内蒙古农业大学 2019
[2]褪黑素缓解番茄低温与水分胁迫机理研究[D]. 丁飞.西北农林科技大学 2017
[3]RING结构泛素连接酶RNF186的功能研究[D]. 王鹏.中国科学技术大学 2013
硕士论文
[1]柽柳ThTIP和ThDUF106基因的遗传转化及功能分析[D]. 刘彩霞.东北林业大学 2017
[2]大豆E3泛素连接酶基因GmARI的克隆与功能验证[D]. 张孝廉.南京农业大学 2012
[3]柽柳ThDREB和TheIF1A基因抗逆功能研究[D]. 于丽丽.东北林业大学 2011
本文编号：3612621
【文章来源】：哈尔滨师范大学黑龙江省
【文章页数】：84 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
渗透胁迫与ABA信号转导途径(zhuetal，2016)
SOS通路图示(Mahajanetal，2008)
第2章牵牛PnLOG2基因克隆及生物信息学分析17运用SOPMA(https://npsa-prabi.ibcp.fr/cgi-bin/npsa_automat.pl?page=/NPSA/npsa_sopma.html)网站，SOPMA构象种类选择3类，输入序列，其他参数默认，预测蛋白二级结构。(3)蛋白三级结构的预测利用SWISS-MODEL(http://swissmodel.expasy.org/)在线的同源建模软件，选择AutomatedMode开始建模，输入FASTA、Clustal等格式的序列，输入标题和邮箱，运行寻找模板，在得到模版后，选择最佳的模板进行建模，并输出PDB文件。并用SAVE(http://services.mbi.ucla.edu/SAVES/)在线软件中的ERRAT、VERIFY3D和PROCHECK对模型进行检测，将从SWISS-MODEL网站中得到的PDB文件输入SAVE网站进行检测并得出Ramachandran图。2.3结果与分析2.3.1植物总RNA提取从圆叶牵牛(IpomoeapurpureaLam.)中提取总RNA进行电泳检测，结果如图2-1，可见两条清晰明亮的带，这两条带分别为28S和18S，其中28S的亮度达到了18S亮度的两倍以上，确定RNA质量符合要求，可以用于后续实验。图2-1圆叶牵牛总RNA提取Figure2-1TotalRNAextractionofmorninggloryM：DL2000Marker；1-2：圆叶牵牛总RNAM:DL2000Marker;1-2;TotalRNAroundleafmorningglory图2-2PnLOG2基因PCR扩增电泳图Figure2-2PnLOG2genePCRamplificationelectrophoresisfigureM：DL2000Marker；1-2：PnLOG2基因PCR产物M:DL2000Marker;1-2;PnLOG2genePCRofproduct
【参考文献】：
期刊论文
[1]矮牵牛PhUBC2-1基因响应干旱胁迫表达与功能分析[J]. 马健宇,金晓霞,陈超,于丽杰. 分子植物育种. 2020(23)
[2]大豆UBC基因家族鉴定及GmUBC46基因的功能初步分析[J]. 陈超,乔艳花,井常煦,卢文秀,金晓霞,于丽杰. 植物遗传资源学报. 2020(01)
[3]26S蛋白酶体调控微管蛋白的降解[J]. 潘婷,杨慕童,刘阳轩,孙秀强,涂升斌,Jan Smalle,汪松虎. 四川大学学报(自然科学版). 2019(02)
[4]圆叶牵牛对衡水湖野大豆的化感作用研究[J]. 高汝勇. 现代园艺. 2018(22)
[5]圆叶牵牛化学成分研究[J]. 李阳,肖朝江,刘健,沈怡,董相,姜北. 广西植物. 2019(07)
[6]植物应答非生物胁迫信号传导研究进展[J]. 刘铃,武小龙,诸葛强. 分子植物育种. 2018(02)
[7]泛素/26S蛋白酶体途径在水稻中的生物学功能研究进展[J]. 徐丹丹,孙帆,王银晓,石英尧,王文生,傅彬英. 中国农业科技导报. 2018(01)
[8]牵牛E3泛素连接酶PNRma1基因的克隆及抗旱相关性分析[J]. 代锦绣,董轩名,倪欢欢,董延龙,金晓霞. 中国林副特产. 2017(06)
[9]RING-finger类型泛素连接酶E3及其与植物抗旱性的关系[J]. 秦岭,杨延兵,陈二影,张华文,王海莲,刘宾,管延安. 分子植物育种. 2017(07)
[10]泛素化修饰调控脱落酸介导的信号途径[J]. 于菲菲,谢旗. 遗传. 2017(08)
博士论文
[1]柠条锦鸡儿与中间锦鸡儿中4个E3泛素连接酶基因的功能分析[D]. 岳文冉.内蒙古农业大学 2019
[2]褪黑素缓解番茄低温与水分胁迫机理研究[D]. 丁飞.西北农林科技大学 2017
[3]RING结构泛素连接酶RNF186的功能研究[D]. 王鹏.中国科学技术大学 2013
硕士论文
[1]柽柳ThTIP和ThDUF106基因的遗传转化及功能分析[D]. 刘彩霞.东北林业大学 2017
[2]大豆E3泛素连接酶基因GmARI的克隆与功能验证[D]. 张孝廉.南京农业大学 2012
[3]柽柳ThDREB和TheIF1A基因抗逆功能研究[D]. 于丽丽.东北林业大学 2011
本文编号：3612621
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3612621.html
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