小鼠Zbtb38基因慢病毒过表达质粒的构建与鉴定

发布时间：2022-02-05 07:32

　　本研究旨在构建Zbtb38（zinc finger and BTB domain containing 38）基因慢病毒过表达质粒载体。以小鼠脊髓组织为材料,采用重叠延伸PCR方法扩增小鼠Zbtb38基因的CDS序列,分别设计Zbtb38 CDS序列前段扩增引物1和后段扩增引物2,再以上述两对引物的扩增产物作为模板,设计引物3并进行融合PCR扩增,由此得到Zbtb38 CDS全序列。将获得的Zbtb38基因CDS全序列连接到质粒pGM-T,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,采用直接PCR鉴定阳性克隆并进行测序验证。利用XhoⅠ和BamHⅠ双酶切方法将Zbtb38 CDS序列连接至慢病毒载体Plvx-puro,获得穿梭质粒Plvx-puro-Zbtb38,再与慢病毒包装质粒共转染293T细胞生产慢病毒颗粒。结果显示,引物1扩增产物包含Zbtb38 CDS全序列的第1-1 794 bp,扩增产物实际测序长度为1 772 bp,引物2扩增产物包含Zbtb38 CDS全序列的第1 762-3 594 bp,扩增产物实际测序长度为1 818 bp,说明分段扩增目的片段已成功。引物3扩增的预期融合产... 

【文章来源】：中国畜牧兽医. 2020,47(10)北大核心

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

Plvx-puro-Zbtb38过表达质粒图谱

利用实时荧光定量PCR检测所生产病毒的滴度,结果见表3。选取第一组数据计算病毒滴度:细胞数目为3.5×104,滴度为3.25×108 Tu/mL。满足普通动物注射标准要求。图3 引物2 PCR扩增Zbtb38 CDS后段结果

引物2 PCR扩增Zbtb38 CDS后段结果

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
[1]应用慢病毒介导生产转基因鸡的初步研究[D]. 陈忠毅.广西大学 2017



本文编号：3614831