瘤胃中乳酸菌亚油酸异构酶基因的克隆表达及多态性分析
发布时间：2022-02-11 08:30
共轭亚油酸（Conjugated linoleic acid,CLA）通常是指含有顺式或反式共轭双键的一系列构型和位置异构的亚油酸的总称。CLA具有丰富的营养价值,不同的异构体也具有不同的生理功能,如c9,t11-CLA具有抑癌作用,而t10,c12-CLA则能够预防糖尿病和减肥。本研究以从黄牛瘤胃中筛选到的四株具有亚油酸异构酶活性的乳酸菌为出发菌株,通过PCR扩增得到LAI基因后,构建了四株原核工程菌,并利用PCR-RFLP技术对得到的LAI基因进行多态性分析。实验结果如下:1.亚油酸异构酶原核工程菌的构建及表达:本实验室从黄牛瘤胃中分离得到四株具有将LA转化为CLA能力的乳酸菌,通过PCR技术扩增得到LAI基因,PCR产物克隆到pUCm-T质粒中,得到重组质粒（pUCm-T-LAI）,经PCR鉴定、酶切分析和克隆测序鉴定克隆成功后,亚克隆至表达载体pET-DsbA中,构建重组表达载体（pET-DsbA-LAI）并转化到E.coli DH5α中,经PCR鉴定与酶切分析证明重组表达载体（pET-DsbA-LAI）构建成功后,转化到E.coli BL21中进行诱导表达,SDS-PAGE电...
【文章来源】：南昌大学江西省211工程院校
【文章页数】：92 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CLl4的空间结构
而 乳 球 乳 杆 菌 乳 亚 种 (Lactobacillus lactis subsp. lactis I11403)(GeneID:1114586) 和 詹 士 乳 杆 菌 (Lactobacillus johnsonii NCC533)(GeneID:2743639)与其的同源性也分别达到 63%和 70%。值得研究的是，嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus NCFM)基因组和罗伊氏乳杆菌的比对结果发现其基因组上含有两段与罗伊氏乳杆菌同源性较高的片段，而且这两段序列在基因组上的位置还比较相近，分别为 542229-544001 bp和 634809 -636584 bp。嗜酸乳杆菌虽然已经被证实具有 c9,t11-催化活性，但是关于这两段序列是如何进行诱导表达，而其表达的产物的在反应中的具体作用还需要再进行研究。采 用 Bioediter 7.0 软 件 对 加 氏 乳 杆 菌 (Lactobacillusgasseri)(GeneID:28877223)、嗜酸乳杆菌、Lactobacillus reuteri 及詹士乳杆菌的亚油酸异构酶的氨基酸序列的疏水性进行分析，实验发现，这四种乳杆菌的疏水性图谱存在高度相似性(图 1.2)。因此可以推断这四种乳杆菌的同源序列的空间结构可能也存在高度相似，也就是说其对应的蛋白质的结构和性质也高度相似。
第 1 章 引言物乳杆菌 WCFS1 的全基因组与罗伊氏乳杆菌的亚油酸异构酶序列进行比对分析后发现，其基因组上含有一段与后者同源性为 32%的氨基酸序列，该氨基酸编码序列全长为 1710 bp，可以编码 569 个氨基酸。植物乳杆菌和罗伊氏乳杆菌虽然都属于乳酸杆菌属，但是这两者在亲缘关系上并不相近，这可能便是导致植物乳杆菌中的亚油酸异构酶基因序列和其他几株乳酸杆菌的同源性不高的原因。然而采用 Bioediter 7.0 软件对植物乳杆菌的亚油酸异构酶的氨基酸序列和罗伊氏乳杆菌进行疏水性分析后发现，它们的疏水性图谱仍存在较高的相似性(图 1.3)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Morphological and AFLP-Based Genetic Diversity in Rosa platyacantha Population in Eastern Tianshan Mountains of Northwestern China[J]. YANG Shuhua,GUO Ning,GE Hong. Horticultural Plant Journal. 2016(01)
[2]不饱和脂肪酸在瘤胃氢化的微生物学机制研究进展[J]. 姜雅慧,卜登攀,杨红建,王之盛. 华北农学报. 2015(S1)
[3]酸奶中乳酸菌稳定性的研究[J]. 林莹,代道芳,王旭清,张超. 中国酿造. 2011(04)
[4]人胰高血糖素样肽-1突变体融合蛋白在大肠杆菌中的自诱导表达优化[J]. 顾娟,劳勋,金明飞,黄静,吴自荣. 微生物学通报. 2010(05)
[5]共轭亚油酸生理功能及其合成方法[J]. 王瑾,徐春涛. 食品工程. 2009(03)
[6]共轭亚油酸的生理学功能及健康意义[J]. 刘佩,沈生荣,阮晖,何国庆. 中国粮油学报. 2009(06)
[7]重组大肠杆菌BL21（DE3）-pET28a（+）-bgl诱导表达β-葡聚糖酶的条件优化[J]. 李永仙,郑飞云,李崎,顾国贤. 食品与生物技术学报. 2009(02)
[8]共轭亚油酸对癌的抗性及机制探索[J]. 董贵成,曹丽霞,那日苏,照日格图,李少英,博·格日勒图. 食品科学. 2008(04)
[9]共轭亚油酸的来源及其生物学作用[J]. 王丽芳,卢德勋,马燕芬. 乳业科学与技术. 2008(02)
[10]共轭亚油酸的生理功能[J]. 冯有胜. 重庆工商大学学报(自然科学版). 2007(04)
本文编号：3619948
【文章来源】：南昌大学江西省211工程院校
【文章页数】：92 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CLl4的空间结构
而 乳 球 乳 杆 菌 乳 亚 种 (Lactobacillus lactis subsp. lactis I11403)(GeneID:1114586) 和 詹 士 乳 杆 菌 (Lactobacillus johnsonii NCC533)(GeneID:2743639)与其的同源性也分别达到 63%和 70%。值得研究的是，嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus NCFM)基因组和罗伊氏乳杆菌的比对结果发现其基因组上含有两段与罗伊氏乳杆菌同源性较高的片段，而且这两段序列在基因组上的位置还比较相近，分别为 542229-544001 bp和 634809 -636584 bp。嗜酸乳杆菌虽然已经被证实具有 c9,t11-催化活性，但是关于这两段序列是如何进行诱导表达，而其表达的产物的在反应中的具体作用还需要再进行研究。采 用 Bioediter 7.0 软 件 对 加 氏 乳 杆 菌 (Lactobacillusgasseri)(GeneID:28877223)、嗜酸乳杆菌、Lactobacillus reuteri 及詹士乳杆菌的亚油酸异构酶的氨基酸序列的疏水性进行分析，实验发现，这四种乳杆菌的疏水性图谱存在高度相似性(图 1.2)。因此可以推断这四种乳杆菌的同源序列的空间结构可能也存在高度相似，也就是说其对应的蛋白质的结构和性质也高度相似。
第 1 章 引言物乳杆菌 WCFS1 的全基因组与罗伊氏乳杆菌的亚油酸异构酶序列进行比对分析后发现，其基因组上含有一段与后者同源性为 32%的氨基酸序列，该氨基酸编码序列全长为 1710 bp，可以编码 569 个氨基酸。植物乳杆菌和罗伊氏乳杆菌虽然都属于乳酸杆菌属，但是这两者在亲缘关系上并不相近，这可能便是导致植物乳杆菌中的亚油酸异构酶基因序列和其他几株乳酸杆菌的同源性不高的原因。然而采用 Bioediter 7.0 软件对植物乳杆菌的亚油酸异构酶的氨基酸序列和罗伊氏乳杆菌进行疏水性分析后发现，它们的疏水性图谱仍存在较高的相似性(图 1.3)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Morphological and AFLP-Based Genetic Diversity in Rosa platyacantha Population in Eastern Tianshan Mountains of Northwestern China[J]. YANG Shuhua,GUO Ning,GE Hong. Horticultural Plant Journal. 2016(01)
[2]不饱和脂肪酸在瘤胃氢化的微生物学机制研究进展[J]. 姜雅慧,卜登攀,杨红建,王之盛. 华北农学报. 2015(S1)
[3]酸奶中乳酸菌稳定性的研究[J]. 林莹,代道芳,王旭清,张超. 中国酿造. 2011(04)
[4]人胰高血糖素样肽-1突变体融合蛋白在大肠杆菌中的自诱导表达优化[J]. 顾娟,劳勋,金明飞,黄静,吴自荣. 微生物学通报. 2010(05)
[5]共轭亚油酸生理功能及其合成方法[J]. 王瑾,徐春涛. 食品工程. 2009(03)
[6]共轭亚油酸的生理学功能及健康意义[J]. 刘佩,沈生荣,阮晖,何国庆. 中国粮油学报. 2009(06)
[7]重组大肠杆菌BL21（DE3）-pET28a（+）-bgl诱导表达β-葡聚糖酶的条件优化[J]. 李永仙,郑飞云,李崎,顾国贤. 食品与生物技术学报. 2009(02)
[8]共轭亚油酸对癌的抗性及机制探索[J]. 董贵成,曹丽霞,那日苏,照日格图,李少英,博·格日勒图. 食品科学. 2008(04)
[9]共轭亚油酸的来源及其生物学作用[J]. 王丽芳,卢德勋,马燕芬. 乳业科学与技术. 2008(02)
[10]共轭亚油酸的生理功能[J]. 冯有胜. 重庆工商大学学报(自然科学版). 2007(04)
本文编号：3619948
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