大肠杆菌益生菌Nissle 1917 pic基因缺失株的构建及其相关功能探析
发布时间:2022-02-14 19:49
1917年,德国医生Alfred Nissle从志贺菌感染疫区一名未患肠炎士兵粪便中分离得到一株无致病性的大肠杆菌,故将其命名为Nissle 1917(EcN)。EcN能很好地在肠道生存和定植,且不带有主要的毒力因子,具有明显的益生特性,因此其成为除了一些乳酸杆菌外,人类研究最多的益生菌之一。研究表明Nissle 1917其对人类肠道疾病有一定的疗效,以其为主要成分的商品化药物Mutaflor在欧美多个国家被用于炎症性肠病(IBD)的治疗。近年来,Nissle 1917作为靶向呈递外源蛋白的载体,在治疗人类肠道疾病的过程中扮演了越来越重要的角色。在EcN的基因组上,我们比对分析发现了一种编码肠杆菌科丝氨酸蛋白酶(SPATE)的pic基因,基于NCBI上大肠杆菌EcN基因组上注释的pic基因序列,设计一对用于λ-Red同源重组系统试验的pic基因缺失长引物,其5’端与pi基因缺失部分两侧的基因同源,3’端与pKD3质粒上的氯霉素抗性基因cat同源,通过λ-Red同源重组的方式和程序完成pi基因的缺失。首先以pKD3质粒DNA作模板,利用上述缺失引物PCR扩增出两端与pi基因上下游同源,中...
【文章来源】:扬州大学江苏省
【文章页数】:64 页
【学位级别】:硕士
【部分图文】:
图2-1融合cw基因的PCR产物鉴定??-
将野生型EcN与一次重组菌EcNAp/c:?:ca/分别利用煮沸法制备模板,利用鉴定引物??P3、P4进行PCR扩增鉴定,野生型EcN扩增片段大小应为4008bp,EcNApfc::c加大小??应为1173bp,与琼脂糖凝胶电泳结果吻合,电泳结果如下图2-2所示。??M?1?2??_:|蘑_::_??5〇〇〇bp—??3000bp一??2000bp一??2000bp—??:丨??图2-2?—次重组菌EcNA#c::?W的PCR鉴定??Figure2-2?Identification?of?EcNA/)/c!?I?ca/mutants?by?PCR??M:Trans2kPlus?II?DNAMarker;?1.野生型?EcN;?2.—次重组菌?EcNAp/c:?:car??3.3二次重组菌EcNApfc的鉴定??将野生型EcN与二次重组菌EcNApfc分别利用煮沸法制备模板,利用鉴定引物P3、??P4进行PCR扩增鉴定,野生型EcN扩增片段大小应为4008bp,二次重组菌EcNA^c扩增??片段大小应为262bp,与琼脂糖凝胶电泳结果吻合。结果如下图2-3所示。??
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【参考文献】:
期刊论文
[1]CD14参与固有免疫应答抵御感染的研究进展[J]. 陈志霞,梅舒雅,邵珍珍,李泉. 细胞与分子免疫学杂志. 2016(04)
[2]口服益生菌Escherichia coli Nissle 1917调控断奶仔猪空肠黏膜屏障功能的机理研究[J]. 唐志如,邓欢,孙卫忠,张小龙,张翥. 畜牧兽医学报. 2014(01)
[3]肠道免疫的安全靶向载体:大肠杆菌Nissle1917[J]. 夏芃芃,朱军,朱国强. 微生物学报. 2013(06)
[4]肠杆菌科丝氨酸蛋白酶自动转运家族研究进展[J]. 张俊琪,瞿涤. 微生物与感染. 2010(02)
[5]LPS所介导的信号转导通路研究进展[J]. 杨一新,李桂源. 中南大学学报(医学版). 2006(01)
本文编号:3625166
【文章来源】:扬州大学江苏省
【文章页数】:64 页
【学位级别】:硕士
【部分图文】:
图2-1融合cw基因的PCR产物鉴定??-
将野生型EcN与一次重组菌EcNAp/c:?:ca/分别利用煮沸法制备模板,利用鉴定引物??P3、P4进行PCR扩增鉴定,野生型EcN扩增片段大小应为4008bp,EcNApfc::c加大小??应为1173bp,与琼脂糖凝胶电泳结果吻合,电泳结果如下图2-2所示。??M?1?2??_:|蘑_::_??5〇〇〇bp—??3000bp一??2000bp一??2000bp—??:丨??图2-2?—次重组菌EcNA#c::?W的PCR鉴定??Figure2-2?Identification?of?EcNA/)/c!?I?ca/mutants?by?PCR??M:Trans2kPlus?II?DNAMarker;?1.野生型?EcN;?2.—次重组菌?EcNAp/c:?:car??3.3二次重组菌EcNApfc的鉴定??将野生型EcN与二次重组菌EcNApfc分别利用煮沸法制备模板,利用鉴定引物P3、??P4进行PCR扩增鉴定,野生型EcN扩增片段大小应为4008bp,二次重组菌EcNA^c扩增??片段大小应为262bp,与琼脂糖凝胶电泳结果吻合。结果如下图2-3所示。??
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【参考文献】:
期刊论文
[1]CD14参与固有免疫应答抵御感染的研究进展[J]. 陈志霞,梅舒雅,邵珍珍,李泉. 细胞与分子免疫学杂志. 2016(04)
[2]口服益生菌Escherichia coli Nissle 1917调控断奶仔猪空肠黏膜屏障功能的机理研究[J]. 唐志如,邓欢,孙卫忠,张小龙,张翥. 畜牧兽医学报. 2014(01)
[3]肠道免疫的安全靶向载体:大肠杆菌Nissle1917[J]. 夏芃芃,朱军,朱国强. 微生物学报. 2013(06)
[4]肠杆菌科丝氨酸蛋白酶自动转运家族研究进展[J]. 张俊琪,瞿涤. 微生物与感染. 2010(02)
[5]LPS所介导的信号转导通路研究进展[J]. 杨一新,李桂源. 中南大学学报(医学版). 2006(01)
本文编号:3625166
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